биологические мембраны

ЛАБОРАТОРИЯ КЛЕТОЧНОЙ КОСМЕТИКИ

estra-X

СПИСОК ПАТЕНТОВ С УПОМИНАНИЕМ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ

95114061 Способ получения гиалурона
2017751 Способ получения гиалурона
2192150 БАД для профилактики йодной недостаточности
2112542 Препарат для лечения патологий соединительных тканей
2225206 Препарат для лечения рака молочной железы
2299733 Лечение опорно-двигательного аппарата
2299732 Способ лечения глаукомы
2299726 Противоинфекционная губная помада
2299725 Косметическое средство для ухода за кожей
2198878 Ароматическое соединение
2198702 Способ подготовки трофических язв к аутодермапластике
2198653 Вагинальные суппозитории
2197946 Композиция для ухода за волосами
2197923 Фармацевтическая композиция для лечения отеков роговицы
2298410 Биотрансплантант и способ лечения ревматических и аутоиммунных заболеваний
2197501 Фотоотверженный гель на основе сшитой гиалуроновой кислоты
2197228 Твердые лекарственные формы
2197222 Водная компазиция для ухода за волосами, лица и тела
2297425 Полипептиды
2297240 Композиция с гиалуроновой кислотой
2297230 Фармацевтическая компазиция с ксантоновой смолой
2196588 Глазные капли
2195955 Применение биологически активных веществ
2195926 Дерматологические композиции
2295954 Микрочастицы для доставки нуклеиновых кислот
2295951 Косметика для ухода за кожей лица и век
2195262 Фармакологическое средство на основе гиалуроновой кислоты
2194512 Способ профилактики и коррекции процесса старения кожи
2194478 Лечение экземы
2294716 Расширяемый стент
2194055 Сшитые сополимеры
2099350 Ассоциаты депротонированной гиалуроновой кислоты
2293557 Средство для лечения кожи и слизистых
2292878 Приготовление микроцастиц, содержащих метопропол
2292746 БАД
2192256 Защита кишечника
2191782 Получение модифицированной гиалуроновой кислоты
2292219 Паратиреоидный гормон человека
2291686 Микроцастицы
2191000 Косметическая маска
2290921 Фармацевтические и косметические средства против старения кожи
2290900 Модифицированный биоматериал для использования в офтальмологии
2290899 Получение биоматерьяла
2290397 Новые инданилиденовые соединения
2290186 Лечение сирингомиелии
2288702 Иррингационный раствор для офтальмологии
2288699 Гель для лечения стоматологических заболеваний
2188011 Активирующая остеогенез фармацевтическая композиция
2187327 Средство с антисептиком
2187325 Средство с радиопротекторным действием
2287330 Композиции миноксидила
2186786 Способ получения гиалуроновой кислоты
2186593 Лечение раненого процесса кожи
2286801 Очищение воды
2286781 Лечение ожогов пищевода у детей
2286764 Средство лечения воспалений полости рта
2185840 Лечение инфекционных заболеваний
2286151 Альфа-2-Дельта-Лиганда
2185149 Ранозаживляющий гель
2285527 Лечение ИЛ-6 заболеваний
2184448 Раствор хранения роговицы, включающий гиалуроновую кислоту
2090179 Крем для кожи
2183961 Способ лечения кожи
2284331 Соли алифотических аминов
2284187 Производные амида
2089191 Снизить внутрение давление
2283320 Получение гликозаминогликанов
2283129 Лечение опухолей
2283098 Косметические средства с Q
2182574 Ароматические соединения
2088257 Средство с гипохолестеролемическим действием
2088218 Состав для гигиенических салфеток
2088206 Способ получения препарата, создающего исскуственный загар
2282462 Противомикробные средства
2182008 Интровагинальная компазиция
2181999 Препарат с отсроченным высвобождением
2181998 Новые композиции липидов
2181995 Лечение болевого синдрома
2181295 Вирионная вакцина
2087144 Витамин Е
2379336 Способ стирки
2379052 Вакцинация
2180855Композиция в виде ионного комплекса
2379025 Противоинфекционный гель
2180825 Лечение травм роговицы
2281082 Способ коррекции эстетических и возрастных проблем кожи
2180576 Биоактивная добавка для косметических средств
2280459 Средство для изменения скорости роста или репродукции клеток
2179981 Соли переходного металла
2378010 Жидкие вакцины
2378008 Комбинированные вакцины
2378007 Анаболическое средство
2377973 Растительные экстракты
2280041 Способ получения водорастворимых комплексов гиалурил
2280038 Биополимеры
2323733 Йодный обмен
2377260 Гель
2178693 Противовирусное средство на основе гиалуроновой кислоты
2178692 Облегчающие зуд косметическое средство
2377022 Гемостатические спреи
2376982 Увлажняющая сыворотка для лица
2376974 Трансдермальный гель для лица
2362784 Гипо-и гиперацетилированные менингокковые капсульные сахариды
2177789 Устройство для доставки лекарства к шейке матки
2277954 Крем для лица омолаживающий
2376378 Способ получения метионина
2177332 Биоматериал для предотвращения послеоперационных спаек, с производной гиалуроновой кислотой
2177310 Способ получения таблеток
2376011 Средство для позвоночника
2277410 Косметическое средство
2323748 Медицинская повязка
2276998 Гидрогелевые композиции
2082416 Способ получения препарата с коллагенном из животного сырья
2375081 Адсорбирующее изделие
2375049 Охлаждающий пластырь
2346049 Способ получения гиалурона
2275913 Фармацевтические средства
2174985 Полисахарид с антиоксидантом
2373957 Носитель для лекарственных средств и биологически активных веществ
2373941 Способ коррекции возрастных и патологических изменений кожных покров
2174845 Композиции и способы доставки генетического материала
2174830 Средство для укрепления волос
2373769 Синбиотическая композиция
2274472 Лечение апорно-двигательного аппарата и болевых синдромов
2372929 Профилактическая композиция на основе веществ фенольной природы в липосомной форме
2173563 Способ нанесения на поверхность предметов покрытия на основе гиалуроновой кислоты, её производных и полусинтетических полимеров
2079304 фармацевтическая композиция, обладающая иммуносупрессорной и антимикробной активностью
2273645 Полипептид ожирения
2173154 Фракция кератансульфатолигосахаридов и содержащий ее фармацевтический препарат
2173136 Грязная мазь
2173128 Способ хирургического лечения центральных разрывов сечатки
2078561 Косметическое средство предотвращающее старение кожи
2172490 Способ прогнозирования воспалительных заболеваний молочной железы при эндопластике
2272645 Способ лечения ЦМВ-Инфекции у детей раннего возроста
2272636 Фармацевтическая композиция для местного лечения воспаления
2272635 Фармацевтически активная субстанция для офтальмологии
2272599 Биоматерьял для стабилизации прогрессирующей миопии "Коллаплант"
2172168 Средство для заживления ран на основе гиалуроновой кислоты
2371172 Фармацевтическая композиция для лечения нервной системы на основе стефаглабрина
2171470 Способ прогнозирования послеоперационной трансформации доброкачественных опухолей нервной системы
2077317 Состав для ванн
2271213 Комбинированные композиции, содержащие экстракты из растений и морских животных
2076872 Способ получения окрашенной гиалуроновой кислоты
2076671 Раствор для защиты роговицы
2370281 Конъюгаты гидроксиалкилкрахмал
2370275 Способ лечения (коррекции) косметических и возрастных дефектов кожи
2370258 Фармацевтическая композиция для парентальной доставки в форме лиофилизата
2270023 Способ экстракции и очистки протеогликана хрящего типа (варианты)
2369408 Гемостатическая композиция, включающая гиалуроновую кислоту
2369387 Фармацевтическая композиция для лечения нервной системы
2369379 Нетаблитированные жевательные формы для индивидуального введения
2169136 Производное коричной кислоты
70792 Медицинский аппликатор
20741717 Способ стабилизации аскорбиновой кислоты
2074712 Способ получения препарата, препятствующего преждевременной эякуляции
2367954 Способ прогнозирования развития кожной патологии у женщин с синдромом склерополикистозных яичников (СПКЯ)
2268075 Устройство для электрокинетической доставки
2268052 Средство для лечения воспалительных и дегенеративных заболеваний суставов
2167649 Способ получения твердой дисперсии умеренного водорастворимого лекарственного вещества
2167647 Гель для бритья
2073520 Лечение урологических инфекций
2367476 Биопластический материал
2367475 Мембрана для использования при направленной регенерации тканей
2367469 Фармацевтическая композиция на основе лизоамидазы
2367456 Фармацевтическая композиция обладающая антибактериальным и некролитическим действием
2367455 Фармацевтическая композиция обладающая некролитическим и антибактериальным действием
2267324 Применение антиадгезивных углеводов, препарат для уменьшения и /или блокирования адгезии патогенных веществ
2166934 Композиции включающие биологический агент
2166510 Псевдодипептиды
2366460 Композиции, имеющие высокую противовирусную и антибактериальную активность
2360901 Производные феноксиуксусной кислоты
2165749 Способ восстановления эндотелия роговицы
2265441 Способ укрепления склеры
2365382 Композиции и способы для регуляции развития сосудов
2070879 Соли гликозаминогликанов
2164914 Циклические и гетероциклические N - замещенные - иминогидроксамовые карбоновые кислоты
2264627 Хламидийный конъюктивит
2364399 Фармацевтический препарат на основе стефаглабрина
2264230 Препарат с замедленным высвобождением активного вещества
2363497 Фармацевтические композиции
2363496 Способ увеличения объема мягких тканей
2363473 Способ антифлогистической активации в эксперементе
2363461 Фармацевтический препарат на основе сигетина
2363459 Средства для введения в роговицу глаз для предотвращения офтальмологических нарушений
2363448 Фармацевтические композиции
2163123 Глазные капли
2162687 Усовершенствованнная лекарственная форма индуктора интерферана
2162343 Биосовместимый полимерный материал и способ его получения
2162327 Лечение рака
2067841 Способ получения ароматизатора
2161478 Способ консервированого лечения гонартроза
2361617 Вольфрамовые частицы в качестве рентгеноконтрастных веществ
2361552 Способы и устройства для дренирования жидкостей и понижения внутриглазного давления
2066996 Способ изготовления пленочного материала для офтальмохирургии
2361417 Корм с глюкозамином и экстрактом ивы для профилактики артроза у животных
2161002 Пищевой общеукрепляющий лечебно-профилактический продукт из хрящевой ткани акул
2360928 Комплексная матрица для медико-биологического применения
2160574 Способ лечения глаукомы
2360688 Способ лечения повреждений переферических нервов
2360670 Фармацевтическая композиция при климактерических расстройствах
2360646 Эндолюминальный протез
2260445 Способ усовершенствования транспортировки через легко прспосабливаемый полупроницаемый барьер
2260007 Производные амида
2359975 Способ получения модифицированных арабиногалактанов
2359974 Антигенные Пептиды
2159775 Псевдопептидный продукт
2259833 Фармацевтическая композиция для лечения роговицы глаза
2259816 Ранозаживляющее средство
2259815 Способ коррекции возрастных изменений, связанных с процессами старения кожи
2359706 Способ сохранения офтальмологических растворов
2359704 Антисептическое средство
2359662 Микрокапсулы
2159253 Катионные полимеры
2159111 Средство для ухода за кожей лица
2159105 Композиция для защиты кожи от опасных химических веществ Получение
2158593 Биосовместимый водный раствор
2358728 Способ лечения и предупреждения потери костной ткани
2258517 Способ хирургического лечения травмотических повреждений селезенки пленкой на основе гиалуроновой кислоты
2357968 Кристалические формы производной имидазола
2357957 Ингибиторы P38 и их применение
2157647 Пищевая добавка и ее получение
2357758 Препараты для чрескожной и чересслизистой добавки
2063244 Способ стабилизации растворов
2063140 Способ получения препарата для консервирования мяса
2157381 Способ получения гиалуроновой кислоты
2257198 Композиции микроцастиц
2356909 Белковый комплекс
2356570 Косметическая композиция
2256434 Способ закрытия перфорации барабанной перепонки
2356520 Способ лечения постконтузионного повреждения сечатки глаза
2156133 Гель
2255945 Полимерная композиция
2355761 Средства повторной дифференцировки
2061043 Способ повышения устойчивости урокиназы к нагреванию
2061005 Способ получения красителей для гистологических исследований
2355420 Зубная паста
2355385 Композиции пролонгированного действия с контролируемым высвобождением
2355240 Способ получения пищевого препарата хондропротекторного действия
2155057 Пихтово репейный бальзам
2354409 Способ производства высвобождающих лекарственные средчтва медицинских устройств
2254145 Раневое покрытие на основе коллаген-хитозанового комплекса
2254133 Лечение и профилактика ВИЧ-инфекции у человека
2253439 Фармацевтическая композиция для защиты и улучшения оптических свойств роговици при проведении эндовитреальных вмешательств
2253437 Способ омоложения кожи
2153352 Фармацевтическая композиция обладающая ранозаживляющим и противовоспалительным действием
2353354 Фармацевтический препарат на основе низкомолекулярного индуктора интерферона
2252787 Способ получения искусственной матрицы кожи
2252767 Способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах
2352583 Фармацевтическая композиция содержащая Fc-область иммуноглобулина в качестве носителя
2152403 Модифицированные полисахариды
2352356 Иммуногенная композиция
2352342 Исскусственный физиологический солевый раствор Способ его получения
2352330 Фармацевтический препарат на основе низкомолекулярного индуктора интерферона
2352323 Фармацевтический препарат с модифицированным высвобождением
2152027 Способ подготовки ткани мозга для определения гликозаминогликанов
2251842 Интектицидный состав для борьбы с личинками оводов
2151580 Способ активации пролиферации эндотелия роговицы
2351648 Дифференцировка стромальных клеток, полученных из жировой ткани, в эндокринные клетки поджелудочной железы и их использование
2351595 N - гидроксиформамидные соединения в качестве ингибиторов металлопротеина
2251411 Косметическое средство в лиофилизированной фармацевтической форме
2251405 Косметика...ее композиции для косметических препаратов
2251367 Средство со сшитой гиалуроновой кислотой для наращивания тканей
2351359 Косметика для профилактики и лечения избыточной массы тела
2351322 Препарат на основе низкомолекулярного индуктора интерферона
2351153 Диета при остеортрите собак
2350958 Способ определения групповой принадлежности синовальной жидкости
2350625 Производные гиалуроновой кислоты с пониженной биодеградируемостью
2150266 Крем после бритья
2350354 Фармацевтическое средство содержащие антагонист и фактор некроза
2350340 Способ коррекции процессов регенерации
2350309 Способ лечения избыточной массы тела с помощью рефлексотерапии
2250047 Профилактический продукт из хрящевой ткани гидробионтов
2249467 Медицинский матерьял и изделия на его основе
2055079 Способ получения препарата гиалуроновой кислоты
2349599 Биоадгезив мидии
2054903 Способ лечения коллагеноза у бычков на откорме
2249210 Способ прогнозирования предрасположенности к развитию и тяжести течения деформирующего остеоартроза коленного сустава у взрослых
2349339 Средство для соединительной ткани
2148988 Человеческий интерферона
2148399 Лечение атеросклероза
2148396 Способ определения активного вещества в дифильных мазевых основах
2148375 Способ диагностики близорукости
2348415 Способ противоспаечной терапии после хирургического вмешательства
2348400 Препарат на основе низкомолекулярного индуктора интерферона
2348386 Способ непроникающего хирургического лечения первичной открытоугольной глаукомы
2248213 Лечение Галактозидальной А недостаточности
2347586 Микрофлюидизированные эмульсии типа "масло в воде" и вакцинные средства
2147243 Контрастное средство
2146526 Лечебный препарат дисбактериоза и урогенитальных инфекций
2146148 Терапевтическое применение фактора роста кератиноцитов (ФРК)
2146139 Способ повышения активности макрофагов и комбинации для его осуществления
2346277 Способ диагностики специфического синовита
2345793 Ультразвуковые контрастные вещества и их получение
2345782 Терапевтические комбинации на основе PORIFERA для лечения и предотвращения кожных заболеваний
2245131 Способ коррекции косметических недостатков кожи
2245130 Способ активации восстановительных процессов в коже
2144833 Хондроитиназа
2344809 Получение твердых дозированных форм с использованием сшитого нетермопластичного носителя
2244540 Косметический гель для ухода за кожей лица
2244536 Способ лечения дегенеративно-дистрофических заболеваний тазобедренного сустава
2344167 Хмелевый экстракт
2143884 Агент регулирования дифференциации клеток кожи, культурная среда для клеток или тканей и способ регулирования дифференциации клеток кожи
2343932 Способ получения обладающих пониженной растворимостью в воде пленночных материалов
2343903 Устройство доставки лекарств для контролируемого введения препаратов
2048817 Способ получения материала для лечения ожогов и гнойно - некронических ран
2048803 Гидратантный крем
2242974 Средства и способы лечения воспалительных заболнваний
2142816 Способ получения антигерпетической вакцины
2342923 Средство для обработки рук с увлажняющим эффектом
2142781 Косметика для макияжа ресниц и бровей и агент ингирирующий рост микроорганизмов в косметических средствах
2242251 Трансплантируемые стенты с биоактивными покрытиями
2142257 Способ обработки глазных имплантантов и контакных линз
2342389 Мононатриевая соль
2342107 Способ устранения западения верхнего века при анофтальме
2141828 Средство, пролонгирующее эффективность чесночного порошка
2241489 Косметическое средство матриксных протеинов для залечивания ран
2241443 Средство для лечения герпеса
2241414 Способ получения протезов кровеносных сосудов
2341539 Гидрогель
2141324 Регулятор скорости воздействия препарата для инъекций
2141312 Косметическое средство для ухода за кожей лица
2341296 Средства и способы покрытия медицинских имплантантов
2341272 Средство для неспецифической иммунотерапии
2341266 Стенты с нанесенным покрытием содержащим N - (5-(4-(4-
2341257 Иммуномодулирующее средство
2341255 Средство для лечения климактерических расстройств
2240821 Способ лечения урологических инфекций
2140786 Способ лечения лишая
2140243 Способ хирургического лечения диабетической ретинопатии и отслоек сечатной оболочки
2240140 Медицинская многослойная повязка и изделия на ее основе
2240135 Культура клеток, содержащая клетки - предшественники остеонегеза, имплантант на ее основе и его использование для восстановления целостности кости
2240123 Экзогенные биологически активные коньюгирующие вещества
2139886 Фотоотвержаемое производное гликозаминогликата, сшитое производное гликозаминогликата и способы их получения, способ предотвращения клеточной и тканевой адгезии
2139729 Вакцина. Способ стимулирования иммунной системы
2339386 Средство обладающее радио - и химиозащитным действием
2339369 Лечение офтальмологических нарушений с использованием мочевины и ее производных
2139041 Гидратантный регенерирующий крем и способ его получения
2139039 Косметический суперкрем для ухода за кожей
2139017 Способ получения боисовместимого материала
2138503 Производные камптотецина, способы их получения, уникальное средство
2338556 Средство содержащие антагонист Р2Х - рецептора и нестероидное противоспалительное лекарственное средство
2338514 Косметическое средство для профилактики старения кожи
2138297 Медицинские устройства, подверженные вызываемому разложению
2138295 Покрытие для ран
2337906 Ингибиторы цитозольной фосфолипазы А2 Применение физиологически допустимого корпускулярного ферримагнитного или ферромагнитного материала. Способ формирования магнитометрического изображения
2137501 Устройство формирования изображения
2137477 Способ лечения заболеваний характеризующихся аутоиммунной агрессией
2137467 Крем для кожи лица и тела
2137449 Способ коррекции дефектов преломления в глазу млекопитающего
2137402 Пищевая Добавка БАД
2336899 Способ стимуляции миелопоэза
2336862 Способ получения раствора для лечения роговицы
2336830 Способ восстановления костных структур челюсти
2136696 Новый полипептид и средство против ВИЧ - Инфекции
2336092 Биоадгезивное средство, по существу свободное от воды
2336089 Средство и способ лечения заболеваний периодонтальных и пульпы
2336074 Средства и способы лечения заднего сегмента глаза
2235548 Ранозаживляющее средство
2135186 Способ лечения рефлекторных синдромов при остеохондрозе
2234945 Стабилизатор водного раствора и водосодержащего сырья
2334762 Растворимая ассоциативная карбоксиметилцеллюлоза
2234514 Макропористые хитозановые гранулы и способ их получения. Способ культивирования клеток
2133615 Средство для лечения неврологических заболеваний
2233164 Способ профилактики развития послеоперационных спаек брюшной полости
2133127 Неткатный материал, способ его получения и способ лечения
2333223 Альдегидные производные сиаловой кислоты и средства на их основе
2333007 Полипептидные вакцины для широкой защиты против рядов поколений менингококов с повышенной вирулентностью
2332985 Дозированные формы анестезирующих средств с длительным высвобождением для обезболивания
2132677 Косметическая маска
38603 Пленочный аппликатор
2232594 Средство содержащие ингибирующие остеокластогенез фактор и полисахарид
2332238 Средство для прокладок, раневых повязок и других изделий, контактирующих с кожей
2331668 Стромальные клетки, получение из жировой ткани, для заживления дефектов роговицы и внутриглазных дефектов и их использование
2331438 Альфа - 2 - Дельта Лигант для лечения симптомов нижних мочевыводящих путей
2331411Электропряденые аморфные фармоцевтические средства
2331367 Способ профилактики образования спаек и их рецидива
2130767 Масло в воде для получения косметических и дерматологических средств, способ косметической обработки
2230752 Поперечносшитые гиалуроновые кислоты и их применение в медицине
2230558 Способ восстановления и сохранения здоровья скмьи
2230550 Средства длительного высвобождения, способ их получения и применения
2230458 Поддержания здоровья суставов
2330290 Способ определения состояния метаболических процессов в ткани суставного хряща
2230073 Способ поперечного сшивания карбоксилированных полисахаридов
2329059 Способ лечения полипозного риносинусита
2329037 Комбинированная терапия для лечения иммуновоспалительных заболеваний
2128666 Гиалуроновая кислота и ее соли, способ очистки гиалуроновой кислоты, способ получения гиалуроновой кислоты. Фармацевтический препарат с гиалуроновой кислотой и средства с гиалуроновой кислотой используемые в офтальмологии
2328740 Способ экспресс - оценки действия зубных паст
2128502 Косметический гель
2328272 Суппозитории индуктора интерферона
2328268 Косметика содержащая амфолитный сополимер
2128057 Композиционная мембрана, способ ее получения и способ направленной регенерации тканей с ее применением
2128055 Средство замедленного освобождения и способ его получения
2128049 Свечи
2227743 Полипептидные варианты с повышенной гепаринсвязывающей способностью
2326893 Ковалентное и нековалентное сшивание гидрофильных полимеров
2326697 Новый перевязочный материал для быстрого заживления раневой поверхности кожи
2126264 Фармацевтическое средство с гиалуроновой кислотой
2326137 Способ получения содержащих альгинат пористых формованных изделий
2325902 Способ выделения гликозаминогликанов из минерализованной соединительной ткани
2225195 Репелленты против насекомых
2325193 Сосудистый стент
2325184 Улучшенные везикулы наружной мембраны бактерий
2325153 Многокомпонентная фармацевтическая дозированная форма
2325152 Удерживаемая в желудке система регулируемой доставки лекарственного средства
2029955 Способ предоперационного определения помутнения задней капсулы хрусталика при экстракции катаракты
2324688 Производные бисбензизоселеназолонила с противоопухолевым, противовоспалительным и антитромбоническим действием
2323017 Устройство и способ контролируемый доставки активных веществ в кожу
2323011 Содержащий Коллаген I и Коллаген II способный к рассасыванию внеклеточный матрикс, предназначенный для реконструирования хряща
2322955 Способ изготовления имплантанта для пластики дефектов хрящевой ткани
2322454 Антитело против CCR5
2322263 Система продолжительного высвобождения растворимого лекарственного средства
2221561 Витамин Е и его сложные эфиры
2321634 Гены участвующие в метаболизме углерода и продуцировании энергии
2321597 Биоматерьял, способ его приготовления и его применение, медицинское средство, имплантант и вкладыш
2121340 Средство для похудения
2220737 Средство для улучшения состояния опорно-двигательного аппарата
2220729 Гель используемый в стоматологии
2320720 Способ культивирования фибропластов для заместительной терапии
2320378 Накожный аппликатор
2320369 Средства, содержащие Альфа - 2 - Дельта Лиганды и ингибиторы обратного захвата серотонина/норадреналина
2320362 Местные фармацевтические средства, содержащие проантоцианидины, для лечения дерматитов
2320322 Биоадгезивная доставка лекарств
2320318 Чувствительное к температуре изменяющие состояние средство гидрогеля
2025120 Способ получения препарата, содержащего Фактор /G-CSF/, стимулирующий рост колоний гранулоцитов
2319490 Средство для введения железа при лечении синдрома беспокойных ног
25995 Содержащее адгезив приспособление для фиксации зубных протезов в полости рта
2218907 Средство для ухода за кожей лица и веками
2318830 Способ получения модифицированного дерматансульфата
2118153 Косметика - туш для ресниц
2217441 Способ получения полимера
2317296 Изетионатная соль селективного ингибитора CDK4
2217171 Мембрана для использования при направленной регенерации тканей
2317095 Экстракты ECHINACEA ANGUSTIFOLIA
2216332 Препарат для лечения астроза
2216314 Крем - маска для обезвоженной кожи
2316333 Средство оздоровительно-восстановительных косметических панто-магниевых ванн
2021304 Способ получения биологически активного средства
2115662 Способ получения гиалуроновой кислоты
2315627 Впрыскиваемые имплантанты на керамической основе для заполнения морщин, кожных впадин, шрамов
2315623 Средство получаемое путем лиофилизации препарата
2114862 Способ получения гиалуроновой кислоты
2314791 Лечебно-Косметическое средство
2314791 Косметический крем-бальзам для ухода за кожей лица и шеи
2214600 Способ оценки эффективности лечения неврологических проявлений
2114602 Способ косметической обработки
2114587 Раствор для защиты роговицы
2214283 Имплантант для подкожного или внутрикожного введения
2313370 Медицинские протезы, имеющие улучшенную биологическую совместимость
2313356 Препарат для лечения демодекоза
2313338 Средство на основе этиллинолеата и триэтилцитрата для лечения себореи и угрей
2313328 Косметика содержащая тонкодисперный и пористый порошок
2212880 Способ получения препарата содержащего антибиотик, с замедленным высвобождением активного вещества
2312640 Способ лечения Блефароконьюнктивальной формы синдрома сухого глаза
2017751 Способ получения гиалуроновой кислоты
2312145 Гены CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM, кодирующие белки, участвующие в синтезе мембран и мембранном транспорте
2311458 Белки вызывающие измененную иммуногенную реакцию. Способ их получения и использования
2311183 Улучшенное разделение с использованием гталуроновой кислоты
2311177 Ингибиторы интегрина для лечения заболевания глаз
2300069 Косметическая маска
2211024 Уход за сухой кожей
2310440 Раствор для защиты роговицы от повреждений
2309684 Лечение межфалангового остеоатроза узелковой формы
2309406 Способ мониторинга фиброза печени у больных хроническим гепатитом с (ХГС)
2209088 Опосредованная рецепторами доставка генов с использованием векторов на основе бактериофагов
2308967 Уменьшение объема ткани
2308962 Средство для опорно-дигательного аппарата
2308957 Способ получения препарата для мезотерапии
2308954 Средство для лечения ран, содержащее плазму или сыворотку крови
2308951 Комплексный способ профилактики вагинальных дисбактериозов
2308937 Косметическая биологически активная добавка и косметический литофитокомплекс на ее основе
2208638 ДНК (варианты), способ получения белка
2207885 Способ подачи небольшого объема лечебного раствора к целевому месту
2207858 Лишенные побочных эффектов производные простагландинов для лечения глаукомы
2207845 Твердая лекарственная форма пролонгированного действия
2207844 Препарат для местного неинвазивного применения
2207841 Средства с антиферментативным действием
2306335 Стволовые клетки и решетки полученные из жировой ткани
2306140 Новые рецепторы для Helicobacter pylori и их применение
2205612 Способ эндотелизации IN VITRO протезов кровеносных сосудов
2105540 Депигментирующее средство
2304960 Косметическое средство для кожи
2304616 Гены участвующие в гомеостазе и адаптации
2204550Способ получения длинноцепочечной N-Ацилированной кислотой Аминокислот
2204415 Способ получения изображения
2204394 Средство для лечения грибковых инфекций, желудочных язв
2204366 Способ хирургического лечения глаукомы
2104034 Вагинальное увлажняющие средство, способ его получения
2303991 Биологически активная добавка
2303990 БАД
2303973 Адсорбирующее изделие
2203676 Средство обладающее иммунокорригирующим действием
2203672 Способ предупреждения беременности
2303635 Гены кодирующие белки резистентности и толерантности к стрессам
2303529 Способ фиксации альгинатного геля на твердой фазе, способ получения клеточного чипа на его основе
2203078 Способ лечения гнойных ран
2302412 Гидразоно-малонитрилы
2102400 Способ получения гиалуроновой кислоты
2202356 Способ стимуляции репаративных процессов длительно незаживающих ран и трофических язв
2202336 Средство для ухода за кожей
2302231 Глазные капли
2102082 Способ магнитометрического исследования тела человека или животного
2301814 Полиакриламидный гидрогель
2201765 Гибридные матричные имплантанты и эксплантанты
2301677 Биотрансплантант для лечения дегенеративных и трвматических заболеваний хрящевой ткани и способ его получения
2301676 Способ лечения ревматизма
2301674 Способ лечения больных с переломами нижней челюсти
2301661 Средство с регулируемым освобождением и способ его получения
2005488 Средство для лечения болезней соединительной ткани
2200001 Крем для кожи

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ

Патент №2217171

54) МЕМБРАНА ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРИ НАПРАВЛЕННОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ ТКАНЕЙ

(57) Реферат:

Изобретение относится к многослойной мембране, содержащей матриксный слой, состоящий преимущественно из коллагена II и имеющий рыхлую губчатую структуру, и, по меньшей мере, один барьерный слой, имеющий плотную, относительно непроницаемую структуру. Такая мембрана особенно подходит для использования in vivo при направленной регенерации тканей, в частности для использования при реконструкции костной или хрящевой ткани. Преимуществом использования мембраны является то, что нативные клетки не способны проникнуть в слой или расти в слое, имеющем плотную относительно непроницаемую структуру. 4 с. и 16 з. п. ф-лы. Область техники

Настоящее изобретение относится к имплантату в виде коллагеновой мембраны для использования при направленной регенерации тканей, в частности для использования in vivo при реконструкции костной или хрящевой ткани. Уровень техники

Давно известно, что при регенерации тканей трудно реконструировать хрящевую ткань, например при повреждениях хрящей. Повреждения хрящей могут происходить в любых суставах, хотя крупные суставы, такие как коленный и локтевой, подвергаются наибольшему риску. Такие повреждения могут быть результатом травмы, дегенеративных состояний или вскрытий при остеохондрите. Повреждения суставов являются главным патомеханическим фактором при развитии артроза. Выделение ферментов приводит к воспалительному процессу в синовиальной оболочке, который в свою очередь приводит к стиранию хряща и деструкции поверхности сустава. Недавние попытки регенерировать in vivo суставной хрящ при дефектах хряща включают имплантацию культивированных аутогенных суставных хондроцитов (КСХ). Однако эта методика имела ограниченный успех. В настоящее время общепринято, что реконструкция ткани требует обеспечения матрикса, служащего проводником для клеток, которые растут вдоль волокон и между волокнами матрикса. Недавно было предложено использовать КСХ, высаживаемые на синтетические и природные рассасывающиеся матриксы. Однако попытки реконструкции хрящевой ткани с использованием матриксов на основе полимолочной кислоты, полигликолевой кислоты и коллагена 1 (оссеина, главного компонента сухожилий, связок и хрящей) или коллагена III (упрочняющего компонента стенок полых органов, в том числе кровеносных сосудов, кишечника) требовали, чтобы матриксы заселялись хондроцитами in vitro перед имплантацией. Это дает увеличение числа осложнений, то есть иммунологических воспалительных реакций при участии гигантских клеток и фибробластических клеток на поверхности между имплантатами и тканью, по сравнению со стерильной культурой хондроцитов. Международная заявка, опубликованная под номером WO-A-96/25961, предлагает матриксный имплантат на основе коллагена II (хондрина, главного компонента хрящевой ткани), который может быть имплантирован на участок in vivo и который обеспечивает рост нативных (природных) хондроцитов на поверхности матрикса, результатом которого является регенерация хряща. Однако способность такого матрикса обеспечивать полную регенерацию хрящевой ткани ограничена. Поэтому существует потребность в матриксном имплантате, который обеспечивал бы успешное врастание в него нативных хондроцитов и таким образом - регенерацию хрящевой ткани после имплантации in vivo. В настоящее время авторы изобретения обнаружили, что хрящ и, в конечном счете, новую костную ткань можно реконструировать посредством использования матрикса из коллагена II, который in vivo отграничен не только от окружающей соединительной ткани, но и от подлежащего дефекта кости или хряща. Предполагается, что этого можно достичь за счет использования имплантата в виде многослойной мембраны, которая сама по себе способна предотвращать нежелательное врастание в матрикс окружающих тканей, и который можно хирургически имплантировать на место дефекта, чтобы получить такой эффект. Сущность изобретения

В одном из аспектов изобретение обеспечивает многослойную мембрану, содержащую матриксный слой, состоящий преимущественно из коллагена II и имеющий рыхлую губчатую структуру, и по меньшей мере один барьерный слой, имеющий плотную, относительно непроницаемую структуру. Особым преимуществом использования мембраны согласно настоящему изобретению является то, что нативные клетки не способны проникнуть в слой или расти в слое, имеющем плотную, относительно непроницаемую структуру. Хотя авторам и не хотелось бы быть связанными теорией, в настоящее время считается, что успешная регенерация хряща требует предотвращения быстрого врастания в область дефекта не только нативных клеток тканей, например соединительных тканей, кровеносных сосудов и т.п., но и новой костной ткани. Этого можно достичь при использовании двухслойной мембраны согласно настоящему изобретению, которая служит защитой коллагенового матрикса от врастания нативных клеток ткани с одной стороны. Во время хирургической имплантации эта мембрана может быть использована в сочетании с тканевым трансплантатом, например трансплантатом надкостницы, эффективно предотвращающим врастание нативных клеток ткани с противоположной стороны. Поэтому, например, трансплантат надкостницы может быть первоначально подшит на место так, чтобы он обеспечивал закрытие дефекта кости или хряща. Затем на место дефекта может быть имплантирована двухслойная мембрана согласно настоящему изобретению так, чтобы она находилась в контакте с трансплантатом и могла быть прикреплена таким образом, чтобы матриксный слой был обращен к дефекту кости. Более предпочтительно, двухслойную мембрану согласно настоящему изобретению первоначально имплантируют на место дефекта так, чтобы барьерный слой был обращен к дефекту кости или хряща. Затем укрепляют трансплантат надкостницы так, чтобы он находился в контакте с матриксным слоем. Трансплантат можно приклеить биосовместимым клеем, таким как фибриновый клей, или прикрепить рассасывающимися скобками из полимолочной кислоты, или, если это необходимо или возможно, подшить таким образом, чтобы он впоследствии служил непроницаемым барьером для врастания прилежащей соединительной ткани. В альтернативном способе осуществления изобретения мембрана сама может эффективно предотвращать врастание нативных клеток ткани. Поэтому, с другой стороны, изобретение обеспечивает мембрану, содержащую, по меньшей мере, три слоя, в которой матриксный слой, состоящий, главным образом, из коллагена II и имеющий явно выраженную губчатую структуру, расположен между двумя барьерными слоями, имеющими плотную, относительно непроницаемую структуру. Матриксный слой способен служить средой для врастания нативных хондроцитов, обеспечивая таким образом регенерацию хрящевой ткани. Однако, чтобы еще больше способствовать регенерации хрящевой ткани, матриксный слой может быть импрегнирован хондроцитами, либо перед, либо после имплантации in vivo. Хотя матриксный слой может быть импрегнирован хондроцитами непосредственно перед имплантацией, например, путем инъекции, ожидается, что обычно хондроциты будут вводиться в матриксный слой посредством прямой инъекции суспензии хондроцитов после имплантации. При этом хондроциты, присутствующие в основном слое мембраны, способны осуществлять регенерацию хряща и, в конечном итоге, новой кости, хотя мембрана одновременно предотвращает врастание других типов клеток из окружающих тканей. Хондроциты для использования в настоящем изобретении могут быть получены из таких источников клеток, которые включают аллогенные или аутогенные клетки, выделенные из суставного хряща, надкостницы и надхрящницы, и мезенхимные стволовые клетки костного мозга (клетки стромы). Так как аллогенные клетки обладают потенциалом для иммунного ответа и инфекционных осложнений, предпочтительно выделять хондроциты из аутогенных клеток, в особенности из аутогенного суставного хряща. Методики накопления клеток известны и включают ферментативное расщепление или рост в культуре. Выделенные клетки затем размножают в культуре клеток перед обратным введением в организм. Обычно, по меньшей мере, 106, предпочтительно, по меньшей мере, 107 клеток следует импрегнировать в матриксный слой, чтобы обеспечить оптимальную регенерацию хрящевой ткани. Обычно желательно, чтобы матриксный слой мембраны согласно настоящему изобретению содержал гликозаминогликаны (ГАГ), такие как гиалуроновую кислоту, хондроитин-6-сульфат, кератинсульфат, дерматансульфат и т.п., которые служат для создания природной среды, в которую хондроциты могут внедряться и размножаться. Хотя можно внедрить в коллагеновую основу гликозаминогликаны из разных источников, которые не обязательно имеют такие же состав, молекулярный вес и физиологические свойства, как гликозаминогликаны хряща, предпочтительными гликозаминогликанами являются гликозаминогликаны, экстрагированные из самого хряща. Обычно матриксный слой предпочтительно содержит от 1 до 10 весовых процентов гликозаминогликанов, например 2-6 весовых процента. Хотя некоторые гликозаминогликаны могут присутствовать в непроницаемом слое, большая их часть будет присутствовать в матриксном слое. В нативных коллагенсодержащих тканях ГАГ существуют, по меньшей мере частично, в качестве компонента протеогликанов (ПГ). Использование ГАГ в форме ПГ нежелательно в связи с потенциальными иммунологическими проблемами, которые могут быть вызваны содержанием белков в ПГ. Поэтому предпочтительно матриксный слой практически не должен содержать протеогликанов. Этого можно достичь, изготавливая матриксный слой из смеси очищенного, не содержащего телопептидов коллагена II и гликозаминогликанов. Другие добавки, которые также могут присутствовать в основном слое, включают, например, хондронектин, ламинин, фибронектин, альгинат кальция или анкорин II, помогающие прикреплению хондроцитов к волокнам коллагена II, и факторы роста, такие как фактор индукции хряща (ФИХ), инсулиноподобный фактор роста (ИФР), трансформирующий фактор роста

(ТФГ-

), присутствующий в виде гомодимеров или гетеродимеров, и морфогенетические факторы кости (МФК), такие как нативный или рекомбинантный МФК-2 человека, МФК-3 (остеогенин), МФК-4 и МФК-7 (ОП-1, остеогенный протеин-1). МФК-2 независимо влияет на два способа образования кости - прямое образование кости и образование хряща, который затем удаляется и замещается костью. Композиты из МФК и коллагена, включая костный матрикс, получаемый посредством экстракции из кортикальных костей из различных источников, или деминерализованный костный матрикс, состоят из 90% коллагена и 10% неколлагеновых белков (НКБ) для обеспечения активности МФК или индуцируемого МФК/НКБ хондрогенеза. Костный матрикс - нерастворимая коллагеновая основа - и ламинин или фибронектин действуют как переносчики МФК. Некоторые факторы роста могут также присутствовать в непроницаемом слое. Однако большая часть их будет присутствовать в основном слое. Обычно мембрана содержит от 100 мкг до 5 мг факторов роста. Как указано выше, мембрана включает минимум два слоя, имеющие различные структуры. Предпочтительно барьерный слой мембраны изготавливают, главным образом, из коллагена I и III. Альтернативно он может содержать синтетический материал, например синтетическую рассасывающуюся полимерную сетку, которая может быть покрыта коллагеновым материалом, таким как коллаген I типа и/или коллаген III типа. Примеры подходящих синтетических материалов включают полиэфиры, гомополимеры и сополимеры полигликолевой и полимолочной (ПМК) кислот, сополимеры гликолидов и лактидов, полиортоэфиры и поликапролактоны. Многие примеры этих веществ широко доступны, например, в компании Boehringer Ingelheim в их ассортименте продуктов RESOMER. Предпочтительны ПМК полимеры в виде восков с соответствующим размером молекул, равным примерно 650-1200, и не слишком быстрой деградацией. Особо предпочтительным биодеградируемым полимером является поли(D,L-молочная кислота), в которой соотношение D-лактида и L-лактида равно примерно 70:30. Преимущество таких синтетических материалов состоит в том, что они могут иметь высокую механическую устойчивость, которая позволяет натянуть мембранный имплантат поверх сложных, трехмерных дефектов костей без разрывов. Такие материалы также пригодны для подшивания. Барьерный слой преимущественно состоит из длинных волокон коллагена, которые соединены настолько плотно, что высокомолекулярные вещества не могут проникать через этот барьер. Длинные волокна обеспечивают высокий предел прочности на разрыв и сопротивление разрыву, так что этот материал не только является хорошей разделяющей мембраной, но и его можно легко сшивать. При хирургических операциях важно, чтобы мембранные имплантаты можно было пришивать или прикреплять в нужном положении, а многие мембраны, предлагавшиеся раньше, не обладают этим свойством. Мембрана согласно настоящему изобретению достаточно механически устойчива, чтобы ее можно было хирургически обработать перед имплантацией. Матриксный слой является очень пористым и может иметь удельный вес до 0,02, что обеспечивает очень быстрое врастание клеток в этот слой. Этот слой мембраны, который в норме также содержит гликозаминогликаны, сильно набухает и может поглощать до 5000% жидкости. В идеале матриксный слой должен иметь пористую структуру (пористую объемную фракцию и размер пор), которая дает возможность адгезии и росту клеток и позволяет посеянным клеткам сохранять хондроцитический фенотип, характеризующийся синтезом белков, специфичных для хряща. Размеры пор будут зависеть от процесса сублимационной сушки, используемого для получения основы из коллагена II, но можно ожидать, что он будет в диапазоне от 10 до 120 мкм, например, от 20 до 100 мкм. Опционально размер пор может быть равен примерно 85 мкм. Такой размер пор можно легко получить путем медленного замораживания при температуре от -5oС до -10oС в течение примерно 24 часов с последующей сублимационной сушкой или путем добавления бикарбоната аммония к пасте перед лиофилизацией. Матриксный слой мембраны предпочтительно обеспечивают коллагеном II, полученным из хряща, предпочтительно гиалинового хряща свиней. Хотя желательная толщина матриксного слоя будет зависеть от природы дефекта кости или хряща, подлежащего обработке, в основном можно ожидать, что она будет лежать в диапазоне от 2 до 10 мм, например от 4 до 6 мм. Толщина барьерного слоя предпочтительно равна от 0,2 до 2 мм, например от 0,2 до 0,7 мм. Барьерный слой может представлять собой натуральную животную мембрану, содержащую коллаген I и III. Поскольку ее получают из природного источника, она полностью рассасывается в организме и не образует токсичных продуктов распада. Такие мембраны также обладают особенно высокой прочностью на разрыв как в сухом, так и во влажном состоянии и поэтому могут быть, при необходимости, сшиты хирургическими швами. Во влажном состоянии материал является очень эластичным, что дает возможность натянуть его на дефекты кости неправильной формы. Кроме коллагена, природные животные мембраны содержат много других биоматериалов, которые следует удалить. Известна обработка таких мембран ферментами, растворителями или другими химическими веществами для осуществления очистки и для использования таких мембран в медицине. Большинство из этих материалов являются слишком тонкими, и очень часто их довольно трудно использовать. Коллагеновые фибриллы теряют свой нативный характер, и дополнительным недостатком является то, что материал часто имеет недостаточную прочность для использования в качестве сшиваемого материала, не обладает свойством набухания в воде и не имеет различий между гладкой лицевой стороной и волокнистой обратной стороной. Было обнаружено, что волокнистая форма очищенного коллагена типа I или II, не содержащего телопептида, менее растворимая и биодеградируемая, позволяет получить наиболее благоприятный материал подложки. Мембраны, обеспечивающие барьерный слой продукта согласно настоящему изобретению, включают перитонеальную мембрану телят или свиней, которая сохраняет свою натуральную коллагеновую структуру. Перитонеальные мембраны молодых свиней в возрасте 6-7 недель (весом 60-80 кг) особо предпочтительны. Барьерный слой должен предпочтительно содержать чистый, нативный (не денатурированный) нерастворимый коллаген и может быть изготовлен в соответствии со способом, описанным в WO-A-95/18638. Поэтому натуральную мембрану можно вначале обработать щелочами, например водным раствором NaOH в концентрации 0,2-4 вес. %. Это позволяет произвести омыление всех жиров, а также белков, чувствительных к щелочам. Второй стадией является обработка материала кислотой, обычно неорганической кислотой, такой как HCl. Это удаляет загрязнения, чувствительные к кислоте. Затем материал промывают до тех пор, пока рН не будет находиться в диапазоне 2,5-3,5. После этого мембрана имеет гладкую, или лицевую, сторону и рыхлую, более волокнистую сторону. Может оказаться полезным осуществить образование поперечных связей в мембране путем нагревания до 100-120oС. Коллаген II, используемый для получения матриксного слоя мембраны, можно получить из хряща посредством процедуры, сходной с процедурой, описанной выше для барьерного слоя, содержащего главным образом коллаген I и III. Предпочтительно удалить из хряща воду посредством обработки его ацетоном с последующей экстракцией жира углеводородным растворителем, таким как n-гексан, хотя можно использовать и алканолы, такие как этанол, простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, или хлорированные углеводороды, такие как хлороформ, или их смеси. Обезжиренный материал затем подвергают обработке щелочью, которая омыляет все остаточные жиры и разрушает некоторые из присутствующих белков. В заключение, материал обрабатывают кислотой, которая осуществляет дополнительную деградацию белков. Материалу дают набухнуть в воде и пропускают через коллоидную мельницу для получения пасты. Чтобы получить многослойную мембрану, мягкую пасту, содержащую коллаген II, наносят на волокнистую сторону гладкой мембраны, полученной, например, в соответствии с WO-A-95/18638. В норме мембрану помещают на гладкую поверхность лицевой стороной вниз, так что можно легко нанести пасту из коллагена II, например, посредством втирания в волокнистую сторону мембраны. Паста при этом образует слой любой желаемой толщины, который плотно прилипает к коллагеновой мембране. Образованный таким образом двойной слой подвергают замораживанию и сублимационной сушке для получения желаемой губчатой структуры, имеющей желаемый размер пор. Если необходимо, часть матриксного слоя можно удалить, придав двойной мембране равномерную толщину. Чтобы получить трехслойную мембрану, поверх матриксного слоя размещают вторую гладкую мембрану, причем ее волокнистая сторона контактирует с матриксным слоем. Паста из коллагена II для нанесения на мембрану обычно содержит 1,0-4,0 весовых % коллагена, предпочтительно 2-3 весовых %. Для удобства значение рН этой смеси следует довести до 2,5-4,5, предпочтительно до 3,0-4,0. В материале из коллагена II можно образовать поперечные связи после стадии сублимационной сушки, чтобы стабилизировать матриксный слой. Это также способствует повышению механической устойчивости матриксного слоя и снижению скорости его рассасывания в организме. В идеале уровень поперечного связывания должен быть таким, чтобы скорость деградации матрикса соответствовала скорости регенерации ткани. Физически поперечное связывание можно осуществить посредством нагревания, но его нужно производить осторожно, чтобы избежать нежелательной потери рассасываемости. Предпочтительно нагревание до температур 100-120oС в течение периода от 30 минут до 5 часов. Более предпочтительно поперечное связывание может быть выполнено посредством УФ облучения с использованием УФ лампы, например, в течение периода продолжительностью до 8 часов. Материал из коллагена II обычно содержит гликозаминогликаны. Последние фактически реагируют с коллагеном II, обеспечивая некоторое поперечное связывание, и дают нерастворимый продукт. Если это необходимо, дополнительное поперечное связывание можно осуществить посредством нагревания материала или УФ облучения, как описано выше. Реакцию между гликозаминогликанами и коллагеном можно провести при комнатных температурах при рН в диапазоне 2,5-3,5. Количество гликозаминогликанов может колебаться между 1 и 10 весовыми процентами. Материал можно подвергнуть замораживанию и сублимационной сушке сразу же после этой обработки. Альтернативно образование пасты можно осуществить посредством повышения рН массы из коллагена II. При этой процедуре массу охлаждают примерно до 4oС, а значение рН медленно повышают путем добавления холодного водного раствора NaOH при температуре 4oС, до значений рН 6,5-7,5. Затем массу выдерживают при комнатной температуре в течение 15-25 часов. В это время образуется паста, а после образования пасты массу можно заморозить и подвергнуть сублимационной сушке. Еще одной альтернативой является нейтрализация массы коллагена II до значений рН 6,8-7,4, после удаления воздуха. Смесь помещают в форму и инкубируют в течение 15-20 часов при 37oС. Образуется мелкозернистая паста, которую впоследствии можно заморозить и подвергнуть сублимационной сушке. Какой из этих трех вышеизложенных способов будет использован, зависит от свойств желаемого продукта. Первый процесс дает наиболее стабильный продукт. Однако преципитация может привести к образованию комков материала, и ее нужно проводить очень осторожно. Второй способ дает мягкий и однородный продукт, который, однако, более растворим, чем продукт, полученный в первом процессе. При изготовлении пасты можно дополнительно ввести желаемые вещества, такие как лекарственные препараты, например антибактериальные, такие как тауролидин, или антибиотики, такие как гентамицин. После нанесения пасты на мембрану материал замораживают. Чтобы получить воспроизводимый размер пор, замораживание следует тщательно контролировать, и необходимо точно регулировать скорость и время замораживания, значение рН и размер частиц. Чтобы получить очень мелкие поры, материал можно очень быстро заморозить до очень низкой температуры. Затем замороженную мембрану подвергают сублимационной сушке, а после этого нагревают до 110-130oС. Таким образом получают некоторое перекрестное связывание. После этого подвергнутая сублимационной сушке биомембрана может быть доведена до требуемой толщины, так что толщина матриксного слоя обычно равняется примерно 2 мм. Затем двойную мембрану стерилизуют, например, гамма-излучением или окисью этилена. Стерилизация сильным облучением, например излучением Со60 в дозах порядка 25 кГр, может дезактивировать МФК. При таких обстоятельствах стерильную основу можно перед имплантацией импрегнировать МФК, находящимися в стерильном растворе. Мембрану согласно настоящему изобретению можно использовать в медицине следующими способами. В качестве материала для направленной регенерации тканей. Матриксный слой способствует росту клеток. Барьерный слой ингибирует нежелательный рост клеток. В качестве материала для восстановления дефектов хрящей, то есть поражений, которые не затрагивают субхондральной пластинки, и для восстановления остеохондральных дефектов. Изобретение также позволяет использовать многослойную коллагеновую мембрану, описанную выше, при направленной регенерации тканей. Содержание коллагена II в мембране особенно подходит для регенерации хрящевой ткани, но подходит и для других типов тканей. Поэтому в еще одном аспекте изобретение обеспечивает мембрану, описанную здесь выше, пригодную для использования в качестве имплантата при направленной регенерации тканей. Кроме того, изобретение обеспечивает способ лечения дефектов хрящей или костей в организме человека или животных, вышеуказанный способ включает наложение вышеописанной мембраны на дефект, причем вышеуказанную мембрану ориентируют таким образом, что барьерный слой предотвращает врастание нежелательных типов тканей в область регенерации кости или хряща. Описание примеров осуществления изобретения

Нижеследующие примеры приведены только в качестве иллюстрации. В примерах все стадии процесса следует проводить при асептических условиях, например в "чистых производственных помещениях". Пример 1. (А) Перитонеальные мембраны от молодых телят полностью освобождали от мяса и жира механическими способами, промывали под проточной водой и обрабатывали 2% раствором NaOH в течение двенадцати часов. Затем мембраны промывали под проточной водой и подкисляли 0,5% HCl. После того как материал закислился по всей толщине (примерно через три часа), материал промывали до тех пор, пока не было получено значение рН 3,5. Затем материал усаживали 7% солевым раствором, нейтрализовали 1% раствором NaHCO3 и промывали под проточной водой. Затем материал дегидратировали ацетоном и обезжиривали n-гексаном. В результате был получен барьерный слой, представляющий собой натуральную животную мембрану, содержащую коллаген I и коллаген III. (Б) Замороженный хрящ от свежезабитых свиней погружали в холодную воду, тщательно промывали и механически очищали от остатков мяса, костей и твердых частиц. Затем материал в течение 30 минут промывали под проточной водой. Далее материал три раза измельчали в гомогенизаторе. Размер видимых частиц в конце измельчения составлял примерно 8 мм. Кусочки хряща обезвоживали посредством 4-кратного промывания ацетоном, каждый раз - в течение 8 часов. Затем хрящ обезжиривали посредством 4-кратной экстракции n-гексаном. Каждая обработка длилась минимум 8 часов. Соотношение гексана и хряща было равно 1:10. После обезжиривания хрящу давали набухнуть в питьевой воде. Соотношение вода : материал было равно 10:1. Время обработки было равно 24 часам. Затем материал обрабатывали NaOH (5 вес.%), причем соотношение хряща и жидкости было равно 1: 4, а время обработки было равно 32 часам. Во время обработки кусочки хряща хорошо перемешивали. Далее от хряща отмывали щелочь. Исходный рН, равный 14, при этом снижался до 9-11. Растворенные загрязнения отмывали и отделяли от хряща. Жидкость, образовавшуюся при обработке щелочью, собирали для выделения гликозаминогликана. Коллагеновый материал затем обрабатывали крепким раствором HCl (примерно 3 вес.%), сначала - при значении рН ниже 1,0. Время обработки было равно 4-6 часам. Далее материал промывали холодной водой достаточно долго для того, чтобы значение рН увеличилось до 3-3,5. Все загрязнения удаляли, и продукт представлял собой коллагеновую массу, не содержавшую солей, пригодную для изготовления губок или других коллагеновых материалов. С этой целью масса, полученная из хряща, может быть, в зависимости от желаемого результата, дегазирована, заморожена и подвергнута сублимационной сушке. Экстракт, образующийся при вышеописанной обработке щелочью, содержал гликозаминогликан, щелочи, денатурированные белки и соли. Вначале экстракт нейтрализовали при помощи НСl, значение рН после нейтрализации было равно 6. Затем экстракт обрабатывали фильтрующим устройством, а именно - кизельгуром, который удаляет денатурированные белки. К экстракту добавляли 0,5 весового процента кизельгура и удаляли его путем фильтрации вместе с денатурированным белком. Затем супернатант подвергали ультрафильтрации с использованием мембраны, отделявшей частицы с молекулярным весом примерно 10000 дальтон. Таким образом удаляли соли и оставляли очищенный гликозаминогликан. Раствор гликозаминогликана, полученный таким образом, примешивали к вышеописанному коллагеновому материалу, для получения матрикса из коллагена II, содержащего гликозаминогликан. Масса из коллагена II имела следующие свойства:

TG = 2,8 вес.%,

ГАГ = 3 вес.% (рассчитано в пересчете на коллаген),

Значение рН 3,5. (С) Свежеприготовленную перитонеальную мембрану, приготовленную так, как описано в пункте (А), равномерно вымачивали в воде и расстилали на стеклянной пластинке волокнистой стороной вверх. Далее мембрану тщательно смачивали массой из коллагена II, приготовленной так, как описано в пункте (Б) выше. Мембрану растягивали по плоскости во всех направлениях так, чтобы она оставалась прикрепленной к пластинке. Затем в мембрану втирали массу из коллагена II. На мембрану наносили очень толстый слой массы, и пластинку оставляли на ночь в холодильнике при температуре примерно 4oС. В этот период образовывалась паста. Пасту замораживали при следующих условиях:

Температура ванны: -12oС,

Время: 40 минут. Далее замороженную пасту подвергали сублимационной сушке и затем нагревали до 125oС. Время сублимационной сушки: 14 часов. Затем матриксный слой коллагена II срезали до толщины 1 мм. Пример 2. Свежеприготовленную перитонеальную мембрану из примера 1(А) накладывали на стеклянную пластинку, и в мембрану втирали густую массу коллагена II, имеющую такие же свойства, как в примере 1. 50 г массы коллагена II разводили 100 мл воды и тщательно перемешивали. Во время перемешивания медленно добавляли 100 мл раствора гликозаминогликана. Коллаген преципитировали в форме массы совместно с ГАГ. После преципитации массу гомогенизировали, а полученную таким образом дисперсию наносили на мембрану. В течение ночи образовывалась паста, и обработанную мембрану далее обрабатывали так, как описано в примере 1.

Формула изобретения

1. Многослойная мембрана, пригодная для использования in vivo при реконструкции костной или хрящевой ткани, причем вышеуказанная мембрана содержит матриксный слой, состоящий главным образом из коллагена II и имеющий рыхлую губчатую структуру, и, по меньшей мере, один барьерный слой, имеющий плотную, относительно непроницаемую структуру. 2. Мембрана по п.1, отличающаяся тем, что она содержит один барьерный слой. 3. Мембрана по п.1, отличающаяся тем, что матриксный слой в ней расположен между двумя барьерными слоями. 4. Мембрана по любому из пп.1-3, отличающаяся тем, что матриксный слой изготовлен из коллагена II, полученного из натурального хряща. 5. Мембрана по п.4, отличающаяся тем, что коллаген II получен из гиалинового хряща свиней. 6. Мембрана по п.4 или 5, отличающаяся тем, что коллаген II имеет поперечные связи. 7. Мембрана по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что барьерный слой или барьерные слои изготовлены преимущественно из коллагена I и III. 8. Мембрана по п.7, отличающаяся тем, что барьерный слой или барьерные слои получены из перитонеальной мембраны телят или свиней. 9. Мембрана по любому из пп.1-6, отличающаяся тем, что барьерный слой или барьерные слои включают синтетическую растворимую полимерную сеть, которая может быть покрыта коллагеновым материалом. 10. Мембрана по п.9, отличающаяся тем, что вышеуказанный коллагеновый материал состоит из коллагена I типа и/или III типа. 11. Мембрана по п.9 или 10, отличающаяся тем, что синтетическая полимерная сеть содержит полимер, выбранный из группы, состоящей из полиэфиров, гомополимеров и сополимеров полигликолевой и полимолочной кислоты, сополимеров гликолида и лактида, полиортоэфиров и поликапролактонов. 12. Мембрана по п.11, отличающаяся тем, что полимер является поли(D, L-молочной кислотой), в которой соотношение D-лактида к L-лактиду равно примерно 70:30. 13. Мембрана по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что матриксный слой импрегнирован хондроцитами, выделенными из суставного хряща, надкостницы, перикарда, или мезенхимными стволовыми клетками из костного мозга. 14. Мембрана по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что матриксный слой и/или барьерные слои импрегнированы гликозаминогликаном. 15. Мембрана по п.14, отличающаяся тем, что гликозаминогликан является гиалуроновой кислотой, хондроитин-6-сульфатом, кератинсульфатом, дерматансульфатом. 16. Мембрана по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что матриксный слой и барьерные слои практически не содержат протеогликанов. 17. Мембрана по любому из предшествующих пунктов, отличающаяся тем, что матриксный слой и/или барьерные слои дополнительно содержат хондронектин, ламинин, фибронектин, альгинат кальция, анкорин II, факторы роста или морфогенетические факторы костей. 18. Способ изготовления мембраны по п.1, в котором пасту из коллагена II наносят на поверхность барьерной мембраны, обладающей плотной, относительно непроницаемой структурой, с последующей сублимационной сушкой, в результате чего образуется матриксный слой, имеющий рыхлую губчатую структуру. 19. Имплантат для использования при направленной регенерации тканей, отличающийся тем, что он включает мембрану, как она определена в любом из пп.1-17. 20. Способ лечения дефектов костей или хрящей в теле человека и животных, причем вышеуказанный способ включает наложение мембраны по любому из пп.1-17 на дефект, а вышеуказанная мембрана ориентирована так, что барьерный слой или слои предотвращают врастание нежелательных типов тканей в зону регенерации кости или хряща.