СПИСОК ПАТЕНТОВ С УПОМИНАНИЕМ ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ
-
- 2017751 Способ получения гиалурона
- 2192150 БАД для профилактики йодной недостаточности
- 2112542 Препарат для лечения патологий соединительных тканей
- 2225206 Препарат для лечения рака молочной железы
- 2299733 Лечение опорно-двигательного аппарата
- 2299732 Способ лечения глаукомы
- 2299726 Противоинфекционная губная помада
- 2299725 Косметическое средство для ухода за кожей
- 2198878 Ароматическое соединение
- 2198702 Способ подготовки трофических язв к аутодермапластике
- 2198653 Вагинальные суппозитории
- 2197946 Композиция для ухода за волосами
- 2197923 Фармацевтическая композиция для лечения отеков роговицы
- 2298410 Биотрансплантант и способ лечения ревматических и аутоиммунных заболеваний
- 2197501 Фотоотверженный гель на основе сшитой гиалуроновой кислоты
- 2197228 Твердые лекарственные формы
- 2197222 Водная компазиция для ухода за волосами, лица и тела
- 2297425 Полипептиды
- 2297240 Композиция с гиалуроновой кислотой
- 2297230 Фармацевтическая компазиция с ксантоновой смолой
- 2196588 Глазные капли
- 2195955 Применение биологически активных веществ
- 2195926 Дерматологические композиции
- 2295954 Микрочастицы для доставки нуклеиновых кислот
- 2295951 Косметика для ухода за кожей лица и век
- 2195262 Фармакологическое средство на основе гиалуроновой кислоты
- 2194512 Способ профилактики и коррекции процесса старения кожи
- 2194478 Лечение экземы
- 2294716 Расширяемый стент
- 2194055 Сшитые сополимеры
- 2099350 Ассоциаты депротонированной гиалуроновой кислоты
- 2293557 Средство для лечения кожи и слизистых
- 2292878 Приготовление микроцастиц, содержащих метопропол
- 2292746 БАД
- 2192256 Защита кишечника
- 2191782 Получение модифицированной гиалуроновой кислоты
- 2292219 Паратиреоидный гормон человека
- 2291686 Микроцастицы
- 2191000 Косметическая маска
- 2290921 Фармацевтические и косметические средства против старения кожи
- 2290900 Модифицированный биоматериал для использования в офтальмологии
- 2290899 Получение биоматерьяла
- 2290397 Новые инданилиденовые соединения
- 2290186 Лечение сирингомиелии
- 2288702 Иррингационный раствор для офтальмологии
- 2288699 Гель для лечения стоматологических заболеваний
- 2188011 Активирующая остеогенез фармацевтическая композиция
- 2187327 Средство с антисептиком
- 2187325 Средство с радиопротекторным действием
- 2287330 Композиции миноксидила
- 2186786 Способ получения гиалуроновой кислоты
- 2186593 Лечение раненого процесса кожи
- 2286801 Очищение воды
- 2286781 Лечение ожогов пищевода у детей
- 2286764 Средство лечения воспалений полости рта
- 2185840 Лечение инфекционных заболеваний
- 2286151 Альфа-2-Дельта-Лиганда
- 2185149 Ранозаживляющий гель
- 2285527 Лечение ИЛ-6 заболеваний
- 2184448 Раствор хранения роговицы, включающий гиалуроновую кислоту
- 2090179 Крем для кожи
- 2183961 Способ лечения кожи
- 2284331 Соли алифотических аминов
- 2284187 Производные амида
- 2089191 Снизить внутрение давление
- 2283320 Получение гликозаминогликанов
- 2283129 Лечение опухолей
- 2283098 Косметические средства с Q
- 2182574 Ароматические соединения
- 2088257 Средство с гипохолестеролемическим действием
- 2088218 Состав для гигиенических салфеток
- 2088206 Способ получения препарата, создающего исскуственный загар
- 2282462 Противомикробные средства
- 2182008 Интровагинальная компазиция
- 2181999 Препарат с отсроченным высвобождением
- 2181998 Новые композиции липидов
- 2181995 Лечение болевого синдрома
- 2181295 Вирионная вакцина
- 2087144 Витамин Е
- 2379336 Способ стирки
- 2379052 Вакцинация
- 2180855Композиция в виде ионного комплекса
- 2379025 Противоинфекционный гель
- 2180825 Лечение травм роговицы
- 2281082 Способ коррекции эстетических и возрастных проблем кожи
- 2180576 Биоактивная добавка для косметических средств
- 2280459 Средство для изменения скорости роста или репродукции клеток
- 2179981 Соли переходного металла
- 2378010 Жидкие вакцины
- 2378008 Комбинированные вакцины
- 2378007 Анаболическое средство
- 2377973 Растительные экстракты
- 2280041 Способ получения водорастворимых комплексов гиалурил
- 2280038 Биополимеры
- 2323733 Йодный обмен
- 2377260 Гель
- 2178693 Противовирусное средство на основе гиалуроновой кислоты
- 2178692 Облегчающие зуд косметическое средство
- 2377022 Гемостатические спреи
- 2376982 Увлажняющая сыворотка для лица
- 2376974 Трансдермальный гель для лица
- 2362784 Гипо-и гиперацетилированные менингокковые капсульные сахариды
- 2177789 Устройство для доставки лекарства к шейке матки
- 2277954 Крем для лица омолаживающий
- 2376378 Способ получения метионина
- 2177332 Биоматериал для предотвращения послеоперационных спаек, с производной гиалуроновой кислотой
- 2177310 Способ получения таблеток
- 2376011 Средство для позвоночника
- 2277410 Косметическое средство
- 2323748 Медицинская повязка
- 2276998 Гидрогелевые композиции
- 2082416 Способ получения препарата с коллагенном из животного сырья
- 2375081 Адсорбирующее изделие
- 2375049 Охлаждающий пластырь
- 2346049 Способ получения гиалурона
- 2275913 Фармацевтические средства
- 2174985 Полисахарид с антиоксидантом
- 2373957 Носитель для лекарственных средств и биологически активных веществ
- 2373941 Способ коррекции возрастных и патологических изменений кожных покров
- 2174845 Композиции и способы доставки генетического материала
- 2174830 Средство для укрепления волос
- 2373769 Синбиотическая композиция
- 2274472 Лечение апорно-двигательного аппарата и болевых синдромов
- 2372929 Профилактическая композиция на основе веществ фенольной природы в липосомной форме
- 2173563 Способ нанесения на поверхность предметов покрытия на основе гиалуроновой кислоты, её производных и полусинтетических полимеров
- 2079304 фармацевтическая композиция, обладающая иммуносупрессорной и антимикробной активностью
- 2273645 Полипептид ожирения
- 2173154 Фракция кератансульфатолигосахаридов и содержащий ее фармацевтический препарат
- 2173136 Грязная мазь
- 2173128 Способ хирургического лечения центральных разрывов сечатки
- 2078561 Косметическое средство предотвращающее старение кожи
- 2172490 Способ прогнозирования воспалительных заболеваний молочной железы при эндопластике
- 2272645 Способ лечения ЦМВ-Инфекции у детей раннего возроста
- 2272636 Фармацевтическая композиция для местного лечения воспаления
- 2272635 Фармацевтически активная субстанция для офтальмологии
- 2272599 Биоматерьял для стабилизации прогрессирующей миопии "Коллаплант"
- 2172168 Средство для заживления ран на основе гиалуроновой кислоты
- 2371172 Фармацевтическая композиция для лечения нервной системы на основе стефаглабрина
- 2171470 Способ прогнозирования послеоперационной трансформации доброкачественных опухолей нервной системы
- 2077317 Состав для ванн
- 2271213 Комбинированные композиции, содержащие экстракты из растений и морских животных
- 2076872 Способ получения окрашенной гиалуроновой кислоты
- 2076671 Раствор для защиты роговицы
- 2370281 Конъюгаты гидроксиалкилкрахмал
- 2370275 Способ лечения (коррекции) косметических и возрастных дефектов кожи
- 2370258 Фармацевтическая композиция для парентальной доставки в форме лиофилизата
- 2270023 Способ экстракции и очистки протеогликана хрящего типа (варианты)
- 2369408 Гемостатическая композиция, включающая гиалуроновую кислоту
- 2369387 Фармацевтическая композиция для лечения нервной системы
- 2369379 Нетаблитированные жевательные формы для индивидуального введения
- 2169136 Производное коричной кислоты
- 70792 Медицинский аппликатор
- 20741717 Способ стабилизации аскорбиновой кислоты
- 2074712 Способ получения препарата, препятствующего преждевременной эякуляции
- 2367954 Способ прогнозирования развития кожной патологии у женщин с синдромом склерополикистозных яичников (СПКЯ)
- 2268075 Устройство для электрокинетической доставки
- 2268052 Средство для лечения воспалительных и дегенеративных заболеваний суставов
- 2167649 Способ получения твердой дисперсии умеренного водорастворимого лекарственного вещества
- 2167647 Гель для бритья
- 2073520 Лечение урологических инфекций
- 2367476 Биопластический материал
- 2367475 Мембрана для использования при направленной регенерации тканей
- 2367469 Фармацевтическая композиция на основе лизоамидазы
- 2367456 Фармацевтическая композиция обладающая антибактериальным и некролитическим действием
- 2367455 Фармацевтическая композиция обладающая некролитическим и антибактериальным действием
- 2267324 Применение антиадгезивных углеводов, препарат для уменьшения и /или блокирования адгезии патогенных веществ
- 2166934 Композиции включающие биологический агент
- 2166510 Псевдодипептиды
- 2366460 Композиции, имеющие высокую противовирусную и антибактериальную активность
- 2360901 Производные феноксиуксусной кислоты
- 2165749 Способ восстановления эндотелия роговицы
- 2265441 Способ укрепления склеры
- 2365382 Композиции и способы для регуляции развития сосудов
- 2070879 Соли гликозаминогликанов
- 2164914 Циклические и гетероциклические N - замещенные - иминогидроксамовые карбоновые кислоты
- 2264627 Хламидийный конъюктивит
- 2364399 Фармацевтический препарат на основе стефаглабрина
- 2264230 Препарат с замедленным высвобождением активного вещества
- 2363497 Фармацевтические композиции
- 2363496 Способ увеличения объема мягких тканей
- 2363473 Способ антифлогистической активации в эксперементе
- 2363461 Фармацевтический препарат на основе сигетина
- 2363459 Средства для введения в роговицу глаз для предотвращения офтальмологических нарушений
- 2363448 Фармацевтические композиции
- 2163123 Глазные капли
- 2162687 Усовершенствованнная лекарственная форма индуктора интерферана
- 2162343 Биосовместимый полимерный материал и способ его получения
- 2162327 Лечение рака
- 2067841 Способ получения ароматизатора
- 2161478 Способ консервированого лечения гонартроза
- 2361617 Вольфрамовые частицы в качестве рентгеноконтрастных веществ
- 2361552 Способы и устройства для дренирования жидкостей и понижения внутриглазного давления
- 2066996 Способ изготовления пленочного материала для офтальмохирургии
- 2361417 Корм с глюкозамином и экстрактом ивы для профилактики артроза у животных
- 2161002 Пищевой общеукрепляющий лечебно-профилактический продукт из хрящевой ткани акул
- 2360928 Комплексная матрица для медико-биологического применения
- 2160574 Способ лечения глаукомы
- 2360688 Способ лечения повреждений переферических нервов
- 2360670 Фармацевтическая композиция при климактерических расстройствах
- 2360646 Эндолюминальный протез
- 2260445 Способ усовершенствования транспортировки через легко прспосабливаемый полупроницаемый барьер
- 2260007 Производные амида
- 2359975 Способ получения модифицированных арабиногалактанов
- 2359974 Антигенные Пептиды
- 2159775 Псевдопептидный продукт
- 2259833 Фармацевтическая композиция для лечения роговицы глаза
- 2259816 Ранозаживляющее средство
- 2259815 Способ коррекции возрастных изменений, связанных с процессами старения кожи
- 2359706 Способ сохранения офтальмологических растворов
- 2359704 Антисептическое средство
- 2359662 Микрокапсулы
- 2159253 Катионные полимеры
- 2159111 Средство для ухода за кожей лица
- 2159105 Композиция для защиты кожи от опасных химических веществ Получение
- 2158593 Биосовместимый водный раствор
- 2358728 Способ лечения и предупреждения потери костной ткани
- 2258517 Способ хирургического лечения травмотических повреждений селезенки пленкой на основе гиалуроновой кислоты
- 2357968 Кристалические формы производной имидазола
- 2357957 Ингибиторы P38 и их применение
- 2157647 Пищевая добавка и ее получение
- 2357758 Препараты для чрескожной и чересслизистой добавки
- 2063244 Способ стабилизации растворов
- 2063140 Способ получения препарата для консервирования мяса
- 2157381 Способ получения гиалуроновой кислоты
- 2257198 Композиции микроцастиц
- 2356909 Белковый комплекс
- 2356570 Косметическая композиция
- 2256434 Способ закрытия перфорации барабанной перепонки
- 2356520 Способ лечения постконтузионного повреждения сечатки глаза
- 2156133 Гель
- 2255945 Полимерная композиция
- 2355761 Средства повторной дифференцировки
- 2061043 Способ повышения устойчивости урокиназы к нагреванию
- 2061005 Способ получения красителей для гистологических исследований
- 2355420 Зубная паста
- 2355385 Композиции пролонгированного действия с контролируемым высвобождением
- 2355240 Способ получения пищевого препарата хондропротекторного действия
- 2155057 Пихтово репейный бальзам
- 2354409 Способ производства высвобождающих лекарственные средчтва медицинских устройств
- 2254145 Раневое покрытие на основе коллаген-хитозанового комплекса
- 2254133 Лечение и профилактика ВИЧ-инфекции у человека
- 2253439 Фармацевтическая композиция для защиты и улучшения оптических свойств роговици при проведении эндовитреальных вмешательств
- 2253437 Способ омоложения кожи
- 2153352 Фармацевтическая композиция обладающая ранозаживляющим и противовоспалительным действием
- 2353354 Фармацевтический препарат на основе низкомолекулярного индуктора интерферона
- 2252787 Способ получения искусственной матрицы кожи
- 2252767 Способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах
- 2352583 Фармацевтическая композиция содержащая Fc-область иммуноглобулина в качестве носителя
- 2152403 Модифицированные полисахариды
- 2352356 Иммуногенная композиция
- 2352342 Исскусственный физиологический солевый раствор Способ его получения
- 2352330 Фармацевтический препарат на основе низкомолекулярного индуктора интерферона
- 2352323 Фармацевтический препарат с модифицированным высвобождением
- 2152027 Способ подготовки ткани мозга для определения гликозаминогликанов
- 2251842 Интектицидный состав для борьбы с личинками оводов
- 2151580 Способ активации пролиферации эндотелия роговицы
- 2351648 Дифференцировка стромальных клеток, полученных из жировой ткани, в эндокринные клетки поджелудочной железы и их использование
- 2351595 N - гидроксиформамидные соединения в качестве ингибиторов металлопротеина
- 2251411 Косметическое средство в лиофилизированной фармацевтической форме
- 2251405 Косметика...ее композиции для косметических препаратов
- 2251367 Средство со сшитой гиалуроновой кислотой для наращивания тканей
- 2351359 Косметика для профилактики и лечения избыточной массы тела
- 2351322 Препарат на основе низкомолекулярного индуктора интерферона
- 2351153 Диета при остеортрите собак
- 2350958 Способ определения групповой принадлежности синовальной жидкости
- 2350625 Производные гиалуроновой кислоты с пониженной биодеградируемостью
- 2150266 Крем после бритья
- 2350354 Фармацевтическое средство содержащие антагонист и фактор некроза
- 2350340 Способ коррекции процессов регенерации
- 2350309 Способ лечения избыточной массы тела с помощью рефлексотерапии
- 2250047 Профилактический продукт из хрящевой ткани гидробионтов
- 2249467 Медицинский матерьял и изделия на его основе
- 2055079 Способ получения препарата гиалуроновой кислоты
- 2349599 Биоадгезив мидии
- 2054903 Способ лечения коллагеноза у бычков на откорме
- 2249210 Способ прогнозирования предрасположенности к развитию и тяжести течения деформирующего остеоартроза коленного сустава у взрослых
- 2349339 Средство для соединительной ткани
- 2148988 Человеческий интерферона
- 2148399 Лечение атеросклероза
- 2148396 Способ определения активного вещества в дифильных мазевых основах
- 2148375 Способ диагностики близорукости
- 2348415 Способ противоспаечной терапии после хирургического вмешательства
- 2348400 Препарат на основе низкомолекулярного индуктора интерферона
- 2348386 Способ непроникающего хирургического лечения первичной открытоугольной глаукомы
- 2248213 Лечение Галактозидальной А недостаточности
- 2347586 Микрофлюидизированные эмульсии типа "масло в воде" и вакцинные средства
- 2147243 Контрастное средство
- 2146526 Лечебный препарат дисбактериоза и урогенитальных инфекций
- 2146148 Терапевтическое применение фактора роста кератиноцитов (ФРК)
- 2146139 Способ повышения активности макрофагов и комбинации для его осуществления
- 2346277 Способ диагностики специфического синовита
- 2345793 Ультразвуковые контрастные вещества и их получение
- 2345782 Терапевтические комбинации на основе PORIFERA для лечения и предотвращения кожных заболеваний
- 2245131 Способ коррекции косметических недостатков кожи
- 2245130 Способ активации восстановительных процессов в коже
- 2144833 Хондроитиназа
- 2344809 Получение твердых дозированных форм с использованием сшитого нетермопластичного носителя
- 2244540 Косметический гель для ухода за кожей лица
- 2244536 Способ лечения дегенеративно-дистрофических заболеваний тазобедренного сустава
- 2344167 Хмелевый экстракт
- 2143884 Агент регулирования дифференциации клеток кожи, культурная среда для клеток или тканей и способ регулирования дифференциации клеток кожи
- 2343932 Способ получения обладающих пониженной растворимостью в воде пленночных материалов
- 2343903 Устройство доставки лекарств для контролируемого введения препаратов
- 2048817 Способ получения материала для лечения ожогов и гнойно - некронических ран
- 2048803 Гидратантный крем
- 2242974 Средства и способы лечения воспалительных заболнваний
- 2142816 Способ получения антигерпетической вакцины
- 2342923 Средство для обработки рук с увлажняющим эффектом
- 2142781 Косметика для макияжа ресниц и бровей и агент ингирирующий рост микроорганизмов в косметических средствах
- 2242251 Трансплантируемые стенты с биоактивными покрытиями
- 2142257 Способ обработки глазных имплантантов и контакных линз
- 2342389 Мононатриевая соль
- 2342107 Способ устранения западения верхнего века при анофтальме
- 2141828 Средство, пролонгирующее эффективность чесночного порошка
- 2241489 Косметическое средство матриксных протеинов для залечивания ран
- 2241443 Средство для лечения герпеса
- 2241414 Способ получения протезов кровеносных сосудов
- 2341539 Гидрогель
- 2141324 Регулятор скорости воздействия препарата для инъекций
- 2141312 Косметическое средство для ухода за кожей лица
- 2341296 Средства и способы покрытия медицинских имплантантов
- 2341272 Средство для неспецифической иммунотерапии
- 2341266 Стенты с нанесенным покрытием содержащим N - (5-(4-(4-
- 2341257 Иммуномодулирующее средство
- 2341255 Средство для лечения климактерических расстройств
- 2240821 Способ лечения урологических инфекций
- 2140786 Способ лечения лишая
- 2140243 Способ хирургического лечения диабетической ретинопатии и отслоек сечатной оболочки
- 2240140 Медицинская многослойная повязка и изделия на ее основе
- 2240135 Культура клеток, содержащая клетки - предшественники остеонегеза, имплантант на ее основе и его использование для восстановления целостности кости
- 2240123 Экзогенные биологически активные коньюгирующие вещества
- 2139886 Фотоотвержаемое производное гликозаминогликата, сшитое производное гликозаминогликата и способы их получения, способ предотвращения клеточной и тканевой адгезии
- 2139729 Вакцина. Способ стимулирования иммунной системы
- 2339386 Средство обладающее радио - и химиозащитным действием
- 2339369 Лечение офтальмологических нарушений с использованием мочевины и ее производных
- 2139041 Гидратантный регенерирующий крем и способ его получения
- 2139039 Косметический суперкрем для ухода за кожей
- 2139017 Способ получения боисовместимого материала
- 2138503 Производные камптотецина, способы их получения, уникальное средство
- 2338556 Средство содержащие антагонист Р2Х - рецептора и нестероидное противоспалительное лекарственное средство
- 2338514 Косметическое средство для профилактики старения кожи
- 2138297 Медицинские устройства, подверженные вызываемому разложению
- 2138295 Покрытие для ран
- 2337906 Ингибиторы цитозольной фосфолипазы А2 Применение физиологически допустимого корпускулярного ферримагнитного или ферромагнитного материала. Способ формирования магнитометрического изображения
- 2137501 Устройство формирования изображения
- 2137477 Способ лечения заболеваний характеризующихся аутоиммунной агрессией
- 2137467 Крем для кожи лица и тела
- 2137449 Способ коррекции дефектов преломления в глазу млекопитающего
- 2137402 Пищевая Добавка БАД
- 2336899 Способ стимуляции миелопоэза
- 2336862 Способ получения раствора для лечения роговицы
- 2336830 Способ восстановления костных структур челюсти
- 2136696 Новый полипептид и средство против ВИЧ - Инфекции
- 2336092 Биоадгезивное средство, по существу свободное от воды
- 2336089 Средство и способ лечения заболеваний периодонтальных и пульпы
- 2336074 Средства и способы лечения заднего сегмента глаза
- 2235548 Ранозаживляющее средство
- 2135186 Способ лечения рефлекторных синдромов при остеохондрозе
- 2234945 Стабилизатор водного раствора и водосодержащего сырья
- 2334762 Растворимая ассоциативная карбоксиметилцеллюлоза
- 2234514 Макропористые хитозановые гранулы и способ их получения. Способ культивирования клеток
- 2133615 Средство для лечения неврологических заболеваний
- 2233164 Способ профилактики развития послеоперационных спаек брюшной полости
- 2133127 Неткатный материал, способ его получения и способ лечения
- 2333223 Альдегидные производные сиаловой кислоты и средства на их основе
- 2333007 Полипептидные вакцины для широкой защиты против рядов поколений менингококов с повышенной вирулентностью
- 2332985 Дозированные формы анестезирующих средств с длительным высвобождением для обезболивания
- 2132677 Косметическая маска
- 38603 Пленочный аппликатор
- 2232594 Средство содержащие ингибирующие остеокластогенез фактор и полисахарид
- 2332238 Средство для прокладок, раневых повязок и других изделий, контактирующих с кожей
- 2331668 Стромальные клетки, получение из жировой ткани, для заживления дефектов роговицы и внутриглазных дефектов и их использование
- 2331438 Альфа - 2 - Дельта Лигант для лечения симптомов нижних мочевыводящих путей
- 2331411Электропряденые аморфные фармоцевтические средства
- 2331367 Способ профилактики образования спаек и их рецидива
- 2130767 Масло в воде для получения косметических и дерматологических средств, способ косметической обработки
- 2230752 Поперечносшитые гиалуроновые кислоты и их применение в медицине
- 2230558 Способ восстановления и сохранения здоровья скмьи
- 2230550 Средства длительного высвобождения, способ их получения и применения
- 2230458 Поддержания здоровья суставов
- 2330290 Способ определения состояния метаболических процессов в ткани суставного хряща
- 2230073 Способ поперечного сшивания карбоксилированных полисахаридов
- 2329059 Способ лечения полипозного риносинусита
- 2329037 Комбинированная терапия для лечения иммуновоспалительных заболеваний
- 2128666 Гиалуроновая кислота и ее соли, способ очистки гиалуроновой кислоты, способ получения гиалуроновой кислоты. Фармацевтический препарат с гиалуроновой кислотой и средства с гиалуроновой кислотой используемые в офтальмологии
- 2328740 Способ экспресс - оценки действия зубных паст
- 2128502 Косметический гель
- 2328272 Суппозитории индуктора интерферона
- 2328268 Косметика содержащая амфолитный сополимер
- 2128057 Композиционная мембрана, способ ее получения и способ направленной регенерации тканей с ее применением
- 2128055 Средство замедленного освобождения и способ его получения
- 2128049 Свечи
- 2227743 Полипептидные варианты с повышенной гепаринсвязывающей способностью
- 2326893 Ковалентное и нековалентное сшивание гидрофильных полимеров
- 2326697 Новый перевязочный материал для быстрого заживления раневой поверхности кожи
- 2126264 Фармацевтическое средство с гиалуроновой кислотой
- 2326137 Способ получения содержащих альгинат пористых формованных изделий
- 2325902 Способ выделения гликозаминогликанов из минерализованной соединительной ткани
- 2225195 Репелленты против насекомых
- 2325193 Сосудистый стент
- 2325184 Улучшенные везикулы наружной мембраны бактерий
- 2325153 Многокомпонентная фармацевтическая дозированная форма
- 2325152 Удерживаемая в желудке система регулируемой доставки лекарственного средства
- 2029955 Способ предоперационного определения помутнения задней капсулы хрусталика при экстракции катаракты
- 2324688 Производные бисбензизоселеназолонила с противоопухолевым, противовоспалительным и антитромбоническим действием
- 2323017 Устройство и способ контролируемый доставки активных веществ в кожу
- 2323011 Содержащий Коллаген I и Коллаген II способный к рассасыванию внеклеточный матрикс, предназначенный для реконструирования хряща
- 2322955 Способ изготовления имплантанта для пластики дефектов хрящевой ткани
- 2322454 Антитело против CCR5
- 2322263 Система продолжительного высвобождения растворимого лекарственного средства
- 2221561 Витамин Е и его сложные эфиры
- 2321634 Гены участвующие в метаболизме углерода и продуцировании энергии
- 2321597 Биоматерьял, способ его приготовления и его применение, медицинское средство, имплантант и вкладыш
- 2121340 Средство для похудения
- 2220737 Средство для улучшения состояния опорно-двигательного аппарата
- 2220729 Гель используемый в стоматологии
- 2320720 Способ культивирования фибропластов для заместительной терапии
- 2320378 Накожный аппликатор
- 2320369 Средства, содержащие Альфа - 2 - Дельта Лиганды и ингибиторы обратного захвата серотонина/норадреналина
- 2320362 Местные фармацевтические средства, содержащие проантоцианидины, для лечения дерматитов
- 2320322 Биоадгезивная доставка лекарств
- 2320318 Чувствительное к температуре изменяющие состояние средство гидрогеля
- 2025120 Способ получения препарата, содержащего Фактор /G-CSF/, стимулирующий рост колоний гранулоцитов
- 2319490 Средство для введения железа при лечении синдрома беспокойных ног
- 25995 Содержащее адгезив приспособление для фиксации зубных протезов в полости рта
- 2218907 Средство для ухода за кожей лица и веками
- 2318830 Способ получения модифицированного дерматансульфата
- 2118153 Косметика - туш для ресниц
- 2217441 Способ получения полимера
- 2317296 Изетионатная соль селективного ингибитора CDK4
- 2217171 Мембрана для использования при направленной регенерации тканей
- 2317095 Экстракты ECHINACEA ANGUSTIFOLIA
- 2216332 Препарат для лечения астроза
- 2216314 Крем - маска для обезвоженной кожи
- 2316333 Средство оздоровительно-восстановительных косметических панто-магниевых ванн
- 2021304 Способ получения биологически активного средства
- 2115662 Способ получения гиалуроновой кислоты
- 2315627 Впрыскиваемые имплантанты на керамической основе для заполнения морщин, кожных впадин, шрамов
- 2315623 Средство получаемое путем лиофилизации препарата
- 2114862 Способ получения гиалуроновой кислоты
- 2314791 Лечебно-Косметическое средство
- 2314791 Косметический крем-бальзам для ухода за кожей лица и шеи
- 2214600 Способ оценки эффективности лечения неврологических проявлений
- 2114602 Способ косметической обработки
- 2114587 Раствор для защиты роговицы
- 2214283 Имплантант для подкожного или внутрикожного введения
- 2313370 Медицинские протезы, имеющие улучшенную биологическую совместимость
- 2313356 Препарат для лечения демодекоза
- 2313338 Средство на основе этиллинолеата и триэтилцитрата для лечения себореи и угрей
- 2313328 Косметика содержащая тонкодисперный и пористый порошок
- 2212880 Способ получения препарата содержащего антибиотик, с замедленным высвобождением активного вещества
- 2312640 Способ лечения Блефароконьюнктивальной формы синдрома сухого глаза
- 2017751 Способ получения гиалуроновой кислоты
- 2312145 Гены CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM, кодирующие белки, участвующие в синтезе мембран и мембранном транспорте
- 2311458 Белки вызывающие измененную иммуногенную реакцию. Способ их получения и использования
- 2311183 Улучшенное разделение с использованием гталуроновой кислоты
- 2311177 Ингибиторы интегрина для лечения заболевания глаз
- 2300069 Косметическая маска
- 2211024 Уход за сухой кожей
- 2310440 Раствор для защиты роговицы от повреждений
- 2309684 Лечение межфалангового остеоатроза узелковой формы
- 2309406 Способ мониторинга фиброза печени у больных хроническим гепатитом с (ХГС)
- 2209088 Опосредованная рецепторами доставка генов с использованием векторов на основе бактериофагов
- 2308967 Уменьшение объема ткани
- 2308962 Средство для опорно-дигательного аппарата
- 2308957 Способ получения препарата для мезотерапии
- 2308954 Средство для лечения ран, содержащее плазму или сыворотку крови
- 2308951 Комплексный способ профилактики вагинальных дисбактериозов
- 2308937 Косметическая биологически активная добавка и косметический литофитокомплекс на ее основе
- 2208638 ДНК (варианты), способ получения белка
- 2207885 Способ подачи небольшого объема лечебного раствора к целевому месту
- 2207858 Лишенные побочных эффектов производные простагландинов для лечения глаукомы
- 2207845 Твердая лекарственная форма пролонгированного действия
- 2207844 Препарат для местного неинвазивного применения
- 2207841 Средства с антиферментативным действием
- 2306335 Стволовые клетки и решетки полученные из жировой ткани
- 2306140 Новые рецепторы для Helicobacter pylori и их применение
- 2205612 Способ эндотелизации IN VITRO протезов кровеносных сосудов
- 2105540 Депигментирующее средство
- 2304960 Косметическое средство для кожи
- 2304616 Гены участвующие в гомеостазе и адаптации
- 2204550Способ получения длинноцепочечной N-Ацилированной кислотой Аминокислот
- 2204415 Способ получения изображения
- 2204394 Средство для лечения грибковых инфекций, желудочных язв
- 2204366 Способ хирургического лечения глаукомы
- 2104034 Вагинальное увлажняющие средство, способ его получения
- 2303991 Биологически активная добавка
- 2303990 БАД
- 2303973 Адсорбирующее изделие
- 2203676 Средство обладающее иммунокорригирующим действием
- 2203672 Способ предупреждения беременности
- 2303635 Гены кодирующие белки резистентности и толерантности к стрессам
- 2303529 Способ фиксации альгинатного геля на твердой фазе, способ получения клеточного чипа на его основе
- 2203078 Способ лечения гнойных ран
- 2302412 Гидразоно-малонитрилы
- 2102400 Способ получения гиалуроновой кислоты
- 2202356 Способ стимуляции репаративных процессов длительно незаживающих ран и трофических язв
- 2202336 Средство для ухода за кожей
- 2302231 Глазные капли
- 2102082 Способ магнитометрического исследования тела человека или животного
- 2301814 Полиакриламидный гидрогель
- 2201765 Гибридные матричные имплантанты и эксплантанты
- 2301677 Биотрансплантант для лечения дегенеративных и трвматических заболеваний хрящевой ткани и способ его получения
- 2301676 Способ лечения ревматизма
- 2301674 Способ лечения больных с переломами нижней челюсти
- 2301661 Средство с регулируемым освобождением и способ его получения
- 2005488 Средство для лечения болезней соединительной ткани
- 2200001 Крем для кожи
|
РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ
ФЕДЕРАЛЬНАЯ СЛУЖБА
ПО ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ
ПАТЕНТАМ И ТОВАРНЫМ ЗНАКАМ
|
Патент №2240135 |
(54) КУЛЬТУРА КЛЕТОК, СОДЕРЖАЩАЯ КЛЕТКИ-ПРЕДШЕСТВЕННИКИ ОСТЕОГЕНЕЗА, ИМПЛАНТАТ НА ЕЕ ОСНОВЕ И ЕГО ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ ВОССТАНОВЛЕНИЯ ЦЕЛОСТНОСТИ КОСТИ
(57) Реферат:
Изобретение относится к медицине, а именно к клеточной терапии, и касается культуры клеток, содержащей клетки - предшественники остеогенеза, имплантата на ее основе и его использования для восстановления целостности кости. Изобретение включает культуру клеток, содержащую клетки-предшественники остеогенеза, представляющую собой клетки стромального и лимфо-макрофагального ряда костного мозга млекопитающих, культивированные в питательной среде с 10%-ной бычьей эмбриональной сывороткой в течение 4-7 дней с использованием в качестве индукторов остеогенеза - инсулина, дексаметазона и  -глицерофосфата с 24-часовой обработкой 5-азацитидином в середине цикла и формирующие монослойную культуру с адгезивной способностью не менее 4×104 клеток/см2. Имплантат представляет собой клетки стромального и лимфо-макрофагального аутологичного костного мозга, культивированные в указанной питательной среде на трехмерных носителях, представляющих собой аллогенный костный матрикс и губку из биодеградируемого материала, предварительно обработанных поли-L-орнитином. Указанный имплантат применен для восстановления целостности кости у 7 пациентов. Преимущество изобретения заключается в разработке новых методов стимуляции костеобразования. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 2 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к клеточной терапии, и касается культуры клеток, содержащей клетки-предшественники остеогенеза, имплантата, обладающего остеогенной активностью, способа получения этого имплантата и способа восстановления целостности кости.
Известен способ стимуляции остеорепаративного процесса костной ткани путем привнесения клеток костного мозга в зону дефекта без фиксации [1]. Недостатком данного способа является невозможность создания необходимой концентрации клеток, участвующих в регенерации кости, из-за вымывания их из зоны дефекта.
Известен способ лечения дефектов костей [2], основанный на выделении из костного мозга и размножении в монослойных культурах in vitro стромальных фибробластов костного мозга, заполнение ими трехмерного каркаса с последующей трансплантацией в область дефекта. Данный способ значительно эффективнее предыдущих, но также имеет ряд существенных недостатков:
- чрезвычайно длительные сроки культивирования костномозговых клеток для получения остеогенных клеток (1,5-2,0 месяца);
- удаление при культивировании клеток лимфо-макрофагального ряда, которые индуцируют процессы регенерации поврежденной ткани [3];
- необходимость при культивировании использовать гетерологические фидерные клеточные культуры.
Дальнейшие успехи в разработке методов стимуляции костеобразования связаны с открытием сигналов, стимулирующих рост костной ткани, т.е. выращиванием мезенхимальных стволовых клеток в культуральной среде с направленной дифференциацией их в остеогенные, что позволило исключить использование гетерологичных фидерных культур.
Так, в способе восстановления целостности кости [4], который основан на получении стромальных остеобластоидных клеток путем предварительной процедуры выделения и подготовки их к трансплантации, включающем резецирование аутологичной кости посредством трипсинизации ее измельченных фрагментов, помещением выделенных клеток в культуральные условия с использованием в качестве индукторов остеогенеза аскорбата натрия, гидрокортизона и метилпреднизолона. Клетки пересевают на 12-14 день на микроносители (коллагеновый или гидроксиапатит) с последующим накоплением необходимого количества стромальных клеток, далее проводят инкубацию микроносителей с губчатым каркасом (костный матрикс или пористый гидроксиапатит), предварительно обработанным раствором поли-L-лизина или раствором фибронектина. Подготовленный таким образом комбинированный трансплантат помещают в зону дефекта кости. Общее время подготовки трансплантата к использованию с момента резецирования кости составляет не менее 1-1,5 месяцев, указанный трансплантат использовался в эксперименте только на кроликах.
Указанный метод имеет преимущества по сравнению с методом, описываемым в источнике [2], который состоит в том, что позволяет исходно увеличить количество остеобластоидных клеток за счет трипсинизации кусочков резецированной аутологичной кости; покрытие губчатого каркаса поли-L-лизином или фибронектином существенно повышает адгезивные свойства матрикса для всех видов клеток; использование микроносителей с выращенными на их поверхности клетками препятствует вымыванию клеток из губчатого каркаса и сокращает время инкубации для его заполнения перед трансплантацией.
Однако указанный способ имеет ряд недостатков:
- он не сопровождается хирургической реваскуляризацией трансплантата и может быть использован для устранения только небольших дефектов;
- метод предусматривает длительный период подготовки трансплантата к использованию;
- является травматичным, т.к. связан с предварительной операцией по резецированию собственной здоровой кости;
- отсутствие стандартизации пористости губчатого каркаса не позволяет точно характеризовать степень его заполнения клетками, привнесенными на микроносителях.
Известен метод образования кости in vitro [5], который заключается в заборе костного мозга у крыс, выделении из него стромальных клеток и культивировании их в течение 4 недель в среде с добавлением фетальной сыворотки теленка, антибиотиков и индукторов остеогенеза - аскорбиновой кислоты, -глицерофосфата и дексаметазона. Аскорбиновая кислота добавляется для синтеза коллагена и остеогенеза, а также она регулирует синтез АТФ-азы, щелочной фосфатазы и синтез белков в культурах остеобласто-подобных клеток. -глицерофосфат используется как источник органического фосфора, являясь важным компонентом минерализации. Дексаметазон, являясь синтетическим глюкокортикоидом, индуцирует пролиферацию и заключительную стадию дифференциации остеогенных клеток. Культуру остеогенных клеток человека приготавливают таким же образом, но с использованием аутологичной сыворотки. Через 4 недели наблюдается образование трехмерной минерализованной узелковой структуры, которая содержит минерализованные коллагеновые нити, косте-специфический протеин - остеопонтин, а также отмечено присутствие щелочной фосфатазы, характерной для остеобластных клеток. Культивирование клеток в таких же условиях на гидроксиапатитных блоках показало их минерализацию через 8 недель. Предлагается использование таких клеток в различных имплантатах, однако результаты имплантации клеток при их подкожном введении в области спины экспериментальным животным (крысам) в материалах этого документа не представлены.
Заявка РСТ [6] посвящена процессу направленной дифференциации стромальных клеток, выделенных из клеток костного мозга в тканеспецифические клетки, в том числе и в остеобласты. Такая дифференциация осуществляется посредством их инкубации в искусственной синтетической среде в присутствии трехмерных биосовместимых и биодеградируемых производных гиалуроновой кислоты с добавлением в среду 10%-ной фетальной сыворотки теленка с использованием в качестве индукторов остеогенеза аскорбиновой кислоты и дексаметазона. Однако перед использованием производных гиалуроновой кислоты они обязательно предварительно замачиваются в водном растворе гидроксиапатита. Устойчивую фенотипическую экспрессию остеоцитов наблюдают морфологически, а также окрашиванием клеток на присутствие щелочной фосфатазы. Однако о применении такого материала с выросшими остеоцитами не сообщается.
Наиболее близким источником информации является публикация, касающаяся регенерации и приращения кости с использованием мезенхимальных стволовых клеток [7], которые получают из костного мозга нормальных волонтеров (людей), выращивают их в синтетической среде с 10%-ной фетальной бычьей сывороткой, неадгезированные клетки удаляют, а адгезированные клетки выращивают со сменой среды дважды в неделю и получают первичную культуру на 13 день. Далее клетки серийно размножают, помещая их в чашки с плотностью 3×10 клеток/см2 с добавлением свежей среды и остеогенных факторов, таких как дексаметазон, аскорбиновая кислота и -глицерофосфат. В течение каждых 4 дней просчитывается число клеток, определяют щелочную фосфатазу, а также степень минерализации матрикса. Имплантат готовят посредством инкубации керамических блоков, представляющих собой пористый гидроксиапатит/-трикальций фосфатные блоки с размерами пор 200-450 мкм, которые имеют форму в виде цилиндров ~4 мм в диаметре и 8 мм в длину с центральным каналом диаметром=1 мм или в форме куба с размером сторон 3×3×3 мм. Цилиндры или кубы, предварительно покрытые человеческим фибронектином, инкубируют в клеточной суспензии, содержащей 7,5×106 клеток/мл, в течение 2 часов при 37°С, после чего считают имплантаты готовыми к трансплантации. Приготовление имплантата составляло не менее 8 недель. Однако активность таких имплантатов, содержащих стромальные клетки человека, была проверена только на экспериментальных животных - крысах с обширным повреждением бедра. Полученные результаты указывают на то, что произведенные в культуре клеток человеческие стволовые мезенхимальные клетки, покрывающие соответствующие носители, способны устранить клинически значимый костный дефект на хорошо разработанной модели костной репарации. При этом остеогенная потенция человеческих мезенхимальных клеток была также продемонстрирована на подкожных имплантатах и в исследованиях in vitro. Авторы отмечают свой приоритет, т.к. ими впервые было продемонстрировано, что указанные клетки обладают способностью костеобразования в зонах, которые нуждаются в репарации.
Однако ни в одном из представленных источников не описано применение таких имплантированных клеток для устранения костного дефекта у человека.
В свете изложенного, задача предлагаемого изобретения заключается в разработке культуры мезенхимальных стволовых клеток человека, которые при имплантации in vivo способны к устранению дефекта костной ткани у человека, в том числе и значительного.
Указанная задача решается посредством введения в зону дефекта кости не только клеток стромального ряда, но и лимфо-макрофагального, культивируемых in vitro в присутствии индукторов дифференцировки. направляющих в сторону образования остеобластных и остеокластных клеток, а также секреции цитокинов, стимулирующих костеобразование.
Сущность изобретения
Сущность изобретения заключается в культуре клеток, содержащей клетки стромального и лимфо-макрофагального ряда костного мозга млекопитающих, культивированные в питательной среде с 10%-ной бычьей эмбриональной сывороткой в течение 4-7 дней с использованием в качестве индукторов остеогенеза - инсулина, дексаметазона и -глицерофосфата с 24-часовой обработкой 5-азацитидином в середине цикла и формирующие монослойную культуру с адгезивной способностью не менее 4×104 клеток/см2.
Еще одним аспектом изобретения является то, что в указанной культуре клетки стромального и лимфо-макрофагального ряда костного мозга представлены клетками человека.
Другим аспектом изобретения является то, что указанные клетки являются клетками крысы, морской свинки, кролика, кошки или собаки.
Аутологичный имплантат, который используется в ходе операции по устранению костного дефекта и являющийся имплантатом, обладающий остеогенной активностью, представляет собой трехмерный аллогенный костный матрикс или губку из биодеградируемого материала, полученные культивированием на них клеток стромального и лимфо-макрофагального ряда аутологичного костного мозга млекопитающих в питательной среде с 10%-ной бычьей эмбриональной сывороткой в течение 4-7 дней с использованием в качестве индукторов остеогенеза - инсулина, дексаметазона и -глицерофосфата с 24-часовой обработкой 5-азацитидином в середине цикла и формирующие монослойную культуру с адгезивной способностью не менее 4×104 клеток/см2 и 3×105 клеток/см3 губки из биодеградируемого материала.
Преимущественно в имплантате клетки млекопитающих являются клетками человека.
Еще одним вариантом изобретения является то, что имплантат, представляющий собой аллогенный костный матрикс, выполнен в виде соломки (хвороста) деминерализованной кости, имеющей среднее сечение 1,5-2,0 мм2 и длину 50-100 мм.
Также дополнительно имплантат изготавливают в виде губки из биодеградируемого материала, представляющей собой пластинку толщиной 1,5±0,5 мм шириной 30±5 мм и длиной - в зависимости от длины окружности места стыка имплантата и собственной кости пациента.
Способ получения имплантата заключается в том, что его иготавливают путем адгезии клеток стромального и лимфо-макрофагального ряда аутологичного костного мозга на поверхности аллогенного костного матрикса или губки из биодеградируемого материала, предварительно покрытых поли-L-орнитином с последующим их высушиванием при комнатной температуре и набуханием перед использованием в изотоническом растворе с рН 7,2-7,4, при этом адгезия осуществляется в течение 2 дней посредством культивирования клеток в питательной среде с 10%-ной бычьей эмбриональной сывороткой с добавлением в среду в качестве индукторов остеогенеза - инсулина, дексаметазона и -глицерофосфата с последующей 24-часовой обработкой 5-азацитидином, сменой среды и дополнительным культивированием в течение 1-4 дней в среде без 5-азацитидина.
Еще одним аспектом способа получения имплантата является то, что культивирование клеток осуществляют в течение 4-7 дней при 37°С путем их инкубации в атмосфере воздуха с 5% СO2 при 99%-ной влажности.
Преимущественно питательная среда содержит 0,4-0,8 мкМ инсулина, 10-15 нМ дексаметазона и 7,0 мМ -глицерофосфата.
Дополнительно питательная среда в качестве индуктора остеогенеза может содержать аскорбиновую кислоту в концентрации 0,2 мМ.
Преимущественно обработку 5-азацитидином в течение 24 часов осуществляют в концентрации 3,0-10,0 мкМ.
Способ восстановления целостности кости заключается в том, что костный дефект заполняют реваскуляризованным аутотрансплантатом, представляющим собой часть здоровой кости с надкостницей или отсепарированную надкостницу в случае использования имплантата, представляющего собой аллогенный костный матрикс, выполненный в виде соломки (хвороста), а дистальные и проксимальные области дополнительно окутывают и уплотняют имплантатом, выполненным в виде губки из биодеградируемого материала.
Примеры и осуществление изобретения
Пример 1. Получение клеточной культуры, содержащей клетки предшественники остеогенеза. Стандартный стерильный аллогенный костный матрикс, представляющий собой высушенную деминерализованную кость, полученную по способу [8], из Центрального научно-исследовательского института травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова и стерильную губку из биодеградируемого материала (коллагена), полученного из Лужского завода “Белкозин”, пропитывают 0,01%-ным раствором поли-L-орнитина и высушивают в потоке стерильного воздуха до полного высыхания. За 24 часа до заселения костномозговыми клетками костный матрикс и губку стерильно замачивают в стандартном растворе Эрла или Хэнкса, содержащем 25 мМ HEPES, рН 7,2-7,4, при комнатной температуре.
Забор клеточного материала и его культивирование для получения клеток-предшественников остеогенеза. Под местным обезболиванием пунктируют подвздошную кость пациента и забирают костный мозг в объеме 40-150 мл в стерильную емкость с раствором Хэнкса, содержащим 200 мкг/мл гентамицин, 10,0 мкг/мл инсулин, 0,25 мкМ дексометазон, 250 ед/мл гепарина, за 4-7 дней до основного оперативного вмешательства. Суспензию клеток центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин, осадок клеток ресуспендируют в лизирующем растворе (114 мМ NH4Cl; 7,5 мМ КНСО3; 100 мкМ EDTA) в соотношении 1:4 от исходного объема аспирата, в течение 5-10 мин и центрифугируют 3 мин при 1500 об/мин при комнатной температуре. Гемолизированный супернатант полностью удаляют отсасыванием. Добиваются полного лизиса эритроцитов, для чего процедуру лизирования проводят дважды или трижды с последующим отмыванием клеток центрифугированием. Клеточный осадок, свободный от эритроидных и тромбоцитарных форм, ресуспендируют в ростовой среде Искова, содержащей 0.58 г/л глютамина, 50 мкг/л гентамицина, 10% бычьей эмбриональной сыворотки, 0,4 мкМ инсулина, 10 нМ дексаметазона и 7,0 мМ -глицерофосфата, в концентрации 3×105 кл/мл. Клетки костного мозга засевают в чашки Петри, которые могут быть покрыты коллагеном, поли-L-орнитином или поли-L-лизином, фибронектином или различными смесями матриксных белков, способствующих выживанию и адгезии стволовых мезенхимальных клеток из костного мозга. Адгезированные клетки в культуре пролиферируют и начинают дифференцироваться в остеогенном направлении, при наличии в культуре стволовых гематопоэтических клеток лимфо-макрофагального ряда. На третьи сутки инкубации в культуральную среду вносят 5-азацитидин в концентрации 3,0 мкМ. Через 24 часа среду заменяют на свежую, но без 5-азацитидина и инкубацию продолжают в течение 1-4 дней. Среда инкубации может дополнительно содержать 0,2 мМ аскорбиновой кислоты. Количество жизнеспособных клеток составляет не менее 95% и в концентрации не менее 4×104 кл/см2.
Полученная культура клеток может использоваться или может пересеваться с использованием стандартной процедуры трипсинизации, и/или клеточная суспензия может быть криоконсервирована при -196°С в жидком азоте в среде для криоконсервирования, содержащей бычью эмбриональную сыворотку не менее 50% и 10%-ный диметилсульфоксид.
Аналогичным способом может быть получена культура клеток из экспериментальных животных: крыс, кошек, кроликов, собак и морских свинок.
Пример 2. Получение имплантата, обладающего остеогенной активностью.
Забор клеточного материала производят, как описано в примере 1.
Клеточный осадок, свободный от эритроидных и тромбоцитарных форм, ресуспендируют в ростовой среде Искова, содержащей 0,58 г/л глютамина, 50 мкг/л гентамицина, 10% бычьей эмбриональной сыворотки, 0,8 мкМ инсулина, 15 нМ дексаметазона и 7,0 мМ -глицерофосфата, в концентрации 3×105 кл/мл. Клетки костного мозга засевают в чашки Петри, в которых находятся подготовленные к адгезии клеток аллогенный костный матрикс и губка из биодеградируемого материала. На третьи сутки инкубации в питательную среду вносят 5-азацитидин до конечной концентрации 10 мкМ. Через 24 ч среду отбирают и заменяют на свежую того же состава, но без 5-азацитидина, и инкубируют 1-4 суток в асептических условиях, постоянно микроскопически контролируя жизнеспособность клеток. После чего считают трансплантат годным к применению. Перед использованием трансплантат промывают в растворе Хэнкса, содержащем 50 мкг/мл гентамицина, 0,8 мкМ инсулина, 15 нМ дексаметазона и 7,0 мМ -глицерофосфата, для освобождения от бычьей эмбриональной сыворотки, и в этом свежем растворе при температуре 4-6°С доставляют в операционную и хранят 36 часов до применения. Полученный имплантат содержит не менее 4×104 клеток/см2 и 3×105 клеток/см3 губки.
Аллогенный костный матрикс перед использованием нарезают в виде соломки (хвороста), имеющей среднее сечение 1,5-2,0 мм2 и длину 50-100 мм. Губку из биодеградируемого материала нарезают в виде пластин толщиной 1,5±0,5 мм, шириной 30±5 мм и длиной в зависимости от длины окружности места стыка имплантата и собственной кости пациента, см. фиг.1.
Пример 3. Использование полученного имплантата для восстановления целостности кости. При использовании костно-надкостничного реваскуляризированного аутотрансплантата, после включения в кровоток и определения проходимости анастомозов, а также адекватности кровообращения зоны костного соединения дистального и проксимального концов окутывают и уплотняют губкой из биодеградируемого материала с адгезированными на ней аутоклетками В случае заполнения зоны дефекта аллогенным костным матриксом в виде соломки (хвороста) с адгезированными на нем аутоклетками применяют отсепарированный надкостничный реваскуляризированный аутотрансплантат с использованием окутывания и уплотнения губкой, как и в случае с использованием костно-надкостничного реваскуляризированного аутотрансплантата.
Пластика дефекта выполнена после резекции бедренной кости по поводу саркомы, проведена на 6 больных, седьмой больной имел рецидив ложного сустава бедренной кости после многократных реконструктивных операций. Костная пластика дефектов костно-надкостничным реваскуляризированным аутотрансплантатом и надкостничным реваскуляризированным аутотрансплантатом была выполнена в размере от 5 до 20 см. Для контроля использовали клинические и рентгенологические методы исследования на различных сроках наблюдения. Во всех случаях отмечено полное приживление трансплантата. При этом формирование костной мозоли и восстановление функции конечности наступало в среднем на 1,5-3 месяца раньше, чем после пластики дефектов васкуляризованным аутотрансплантатом иалоберцовой кости или надкостницы без дополнительного применения имплантата с плюрипотентными стволовыми клетками аутологичного костного мозга, см фиг.2 Срок наблюдения 3 года без побочных эффектов.
Таким образом, представленное изобретение показало высокую эффективность имплантатов, заселенных аутологичными клетками стромального и лимфо-макрофагального ряда, при пластике обширных костных дефектов.
При этом применение указанной культуры клеток не может быть ограничено приведенными примерами, поскольку одним из преимуществ ее получения довольно короткий период культивирования 4-7 дней, что позволяет значительно сократить сроки подготовки имплантата к применению и возможность ее использования в пластике любых костных дефектов.
Источники информации
1. Амирбекян В.Х. и др. Тезисы докл. Научной конференции, Ереван, 1978 г.
2. SU 1400616 A1, 07.06.1988
3. Долгушин И.И., Эберт Л.Я., Лифшиц Р.И. Иммунология травмы. Свердловск. Медицина, 1989, с.188.
4. RU 2167662 С1, 27.05.2001.
5. US 6152964, 28.11.2000.
6. WO 97/18842 А1, 29.05.1997.
7. WO 97/40137 А1, 30.10.1997.
8. RU 2147800 C1, 17.02.1999.
Формула изобретения
1. Культура клеток, содержащая клетки-предшественники остеогенеза, характеризующаяся тем, что она представляет собой клетки стромального и лимфо-макрофагального ряда костного мозга млекопитающих, культивированные в питательной среде с 10% бычьей эмбриональной сывороткой в течение 4-7 дней с использованием в качестве индукторов остеогенеза - инсулина, дексаметазона и -глицерофосфата с 24-часовой обработкой 5-азацитидином в середине цикла и формирующие монослойную культуру с адгезивной способностью не менее 4·104 клеток/см2.
2. Культура клеток по п.1, отличающаяся тем, что клетки стромального и лимфо-макрофагального ряда костного мозга являются клетками человека.
3. Культура клеток по п.1, отличающаяся тем, что клетки стромального и лимфо-макрофагального ряда костного мозга являются клетками крысы, морской свинки, кролика, кошки или собаки.
4. Имплантат, обладающий остеогенной активностью, характеризующийся тем, что он представляет собой трехмерный аллогенный костный матрикс или губку из биодеградируемого материала, полученные культивированием на них клеток стромального и лимфо-макрофагального ряда аутологичного костного мозга млекопитающих в питательной среде с 10% бычьей эмбриональной сывороткой в течение 4-7 дней с использованием в качестве индукторов остеогенеза - инсулина, дексаметазона и -глицерофосфата с 24-часовой обработкой 5-азацитидином в середине цикла и формирующие монослойную культуру с адгезивной способностью не менее 4·104 клеток/см2 и 3·105 клеток/см3 губки из биодеградируемого материала.
5. Имплантат по п.4, отличающаяся тем, что млекопитающим является человек.
6. Имплантат по п.4, отличающаяся тем, что аллогенный костный матрикс представляет собой соломку (хворост) из деминерализованной кости, имеющей среднее сечение 1,5-2,0 мм2 и длину 50-100 мм.
7. Имплантат по п.4, отличающаяся тем, что губка из биодеградируемого материала представляет собой пластинку толщиной (1,5±0,5) мм, шириной (30±5) мм и длиной в зависимости от длины окружности места стыка имплантата и собственной кости пациента.
8. Способ получения имплантата по пп.4-7, отличающийся тем, что его изготавливают путем адгезии клеток стромального и лимфо-макрофагального ряда аутологичного костного мозга на поверхности аллогенного костного матрикса или губки из биодеградируемого материала, предварительно покрытых поли-L-орнитином с последующим их высушиванием при комнатной температуре и набуханием перед использованием в изотоническом растворе с рН 7,2-7,4, при этом адгезия осуществляется в течение 2 дней посредством культивирования клеток в питательной среде с 10% бычьей эмбриональной сывороткой с добавлением в среду в качестве индукторов остеогенеза - инсулина, дексаметазона и -глицерофосфата с последующей 24-часовой обработкой 5-азацитидином, сменой среды и дополнительным культивированием в течение 1-4 дней в среде без 5-азацитидина.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что культивирование клеток осуществляют в течение 4-7 дней инкубации при 37°С в атмосфере воздуха с 5% СО2 при 99% влажности.
10. Способ по любому из п.8 или 9, отличающийся тем, что питательная среда содержит 0,4-0,8 мкМ инсулина, 10-15 нМ дексаметазона и 7,0 мМ -глицерофосфата.
11. Способ по любому из пп.8-10, отличающийся тем, что в качестве индукторов остеогенеза дополнительно используют аскорбиновую кислоту в концентрации 0,2 мМ.
12. Способ по любому из пп.8-11, отличающийся тем, что обработку 5-азацитидином осуществляют в концентрации 3-10 мкМ.
13. Способ восстановления целостности кости, включающий заполнение дефекта реваскуляризованным аутотрансплантатом, отличающийся тем, что в качестве аутотрансплантата используют часть здоровой кости с надкостницей или отсепарированную надкостницу с имплантатом по пп.4-7, выполненного в форме аллогенного костного матрикса в виде соломки (хвороста), а дистальный и проксимальный области дефекта дополнительно окутывают и уплотняют губкой из биодеградируемого материала.
|
