(III) СПОСОБ ВЫСУШИВАНИЯ РАСПЫЛЕНИЕМ

Для получения микрокапсул данным способом раствор в органическом растворителе или дисперсию, содержащие композицию, состоящую из биоразлагаемого полимера по настоящему изобретению и физиологически активного соединения, описанного в разделе (I) в вышеуказанном способе высушивания в воде, распыляют в сушильной камере распылительной сушки (устройство для высушивания распылением) с использованием распылительного сопла, и органический растворитель в микронизированных жидких каплях выпаривают в течение очень короткого периода времени с получением микрокапсул. В качестве такого распылительного сопла можно использовать сопло с двумя жидкостями, сопло высокого давления и ротационное дисковое сопло и тому подобное. После этого, если необходимо, можно провести промывание таким образом, как в вышеуказанном способе высушивания в воде (I), затем высушивают вымораживанием, далее высушивают при нагревании.

Касательно иной формы агента, чем вышеуказанные микрокапсулы, раствор в органическом растворителе или дисперсия, содержащие композицию, состоящую из физиологически активного соединения, описанного в способе высушивания в воде в способе получения микрокапсул (I), и биоразлагаемого полимера по настоящему изобретению, можно высушить до твердого состояния выпариванием органического растворителя или воды при одновременной регуляции глубины вакуума с использованием роторного испарителя, затем размельчить с помощью струйной мельницы и тому подобное с получением мелких частиц (микрочастиц).

Затем мелко измельченные частицы можно промыть таким же образом, как описано в способе высушивания в воде в способе получения микрокапсул (I), затем высушить вымораживанием, далее высушить при нагревании.

Способ получения композиции с регулируемым высвобождением (например, микрокапсул), содержащей физиологически активное соединение или его соль по настоящему изобретению, оксинафтойную кислоту или ее соль и полимер молочной кислоты или ее соли по настоящему изобретению, приводится ниже, однако в случае без включения оксинафтойной кислоты получение можно проводить таким же образом.

(I) СПОСОБ ВЫСУШИВАНИЯ В ВОДЕ

(i) Способ с эмульсией М/В

В данном способе вначале готовят раствор оксинафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты или ее соли в органическом растворителе. Органический растворитель, используемый при получении композиции с регулируемым высвобождением по настоящему изобретению, имеет точку кипения предпочтительно 120°С или ниже.

В качестве органического растворителя используют, например, галогенированные углеводороды (например, дихлорметан, хлороформ, дихлорэтан, трихлорэтан, четыреххлористый углерод и тому подобное), простые эфиры (например, этиловый эфир, изопропиловый эфир и тому подобное), эфиры жирных кислот (например, этилацетат, бутилацетат и тому подобное), ароматические углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и тому подобное), спирты (например, этанол, метанол и тому подобное), ацетонитрил и тому подобное. В качестве органического растворителя для полимера молочной кислоты или ее соли, особенно подходящим является дихлорметан.

В качестве органического растворителя для оксинафтойной кислоты или ее соли предпочтительными являются спирты. Их можно растворить по отдельности перед смешиванием или два соединения можно растворить в органическом растворителе, смешанном в подходящей пропорции. Из них предпочтительными являются смешанные растворы галогенированных углеводородов и спиртов и, в частности, наиболее подходящим является смешанный раствор дихлорметана и этанола.

Когда в качестве органического растворителя используется этанол в смеси с дихлорметаном, то содержание этанола в смешанном органическом растворителе из дихлорметана и этанола, как правило, составляет примерно от 0,01 до примерно 50% (об./об.), более предпочтительно примерно от 0,05 до примерно 40% (об./об.), наиболее предпочтительно примерно от 0,1 до примерно 30% (об./об.).

Концентрация полимера молочной кислоты в растворе в органическом растворителе варьирует в зависимости от молекулярной массы полимера молочной кислоты и вида органического растворителя, и когда в качестве органического растворителя используют, например, дихлорметан, то концентрация обычно составляет примерно от 0,5 до примерно 70% по массе, более предпочтительно примерно от 1 до примерно 60% по массе, наиболее предпочтительно примерно от 2 до примерно 50% по массе.

Концентрация оксинафтойной кислоты или ее соли в органическом растворителе составляет, в случае когда в качестве органического растворителя используют смесь дихлорметана и этанола, как правило, примерно от 0,01 до примерно 10% по массе, более предпочтительно примерно от 0,1 до примерно 5% по массе, наиболее предпочтительно примерно от 0,5 до примерно 3% по массе.

В полученный таким образом раствор оксинафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты в органическом растворителе добавляют и растворяют или диспергируют физиологически активное соединение или его соль. Затем полученный раствор в органическом растворителе, содержащем композицию, состоящую из физиологически активного соединения или его соли, оксинафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты или ее соли, добавляют в водную фазу с образованием эмульсии М(масляная фаза)/В(водная фаза), затем растворитель в масляной фазе выпаривают или диспергируют в водной фазе с получением микрокапсул. Объем водной фазы в данном случае, как правило, составляет примерно от 1-кратного до примерно 10000-кратного, более предпочтительно примерно от 5-кратного до примерно 5000-кратного, наиболее предпочтительно примерно от 10-кратного до примерно 2000-кратного по отношению к объему масляной фазы.

В вышеуказанную внешнюю водную фазу можно добавить эмульгатор. Данный эмульгатор может быть любым соединением при условии, что оно, как правило, может образовать стабильную эмульсию М/В. Конкретно используют, например, анионогенные поверхностно-активные вещества (олеат натрия, стеарат натрия, лаурилсульфат натрия и тому подобное), неионогенные поверхностно-активные вещества (эфиры полиоксиэтиленсорбитана [Твин-80, Твин-60 производства Atlas Powder], производные полиоксиэтилированного касторового масла [HCO-60, HCO-50 производства Nikko Chemicals] и тому подобное), поливинилпирролидон, поливиниловый спирт, карбоксиметилцеллюлозу, лецитин, желатин, гиалуроновую кислоту и тому подобное. Можно использовать одно из них или несколько из них в комбинации. Используемая концентрация предпочтительно находится в пределах от 0,01 до 10% по массе, более предпочтительно примерно от 0,05 до примерно 5% по массе.

В вышеуказанную внешнюю водную фазу можно добавить агент, контролирующий осмотическое давление. Контролирующий осмотическое давление агент может быть полезным при условии, что он поддерживает осмотическое давление при внесении в водный раствор.

В качестве агента, контролирующего осмотическое давление, используют, например, многоатомные спирты, одноатомные спирты, моносахариды, дисахариды, олигосахариды и аминокислоты и их производные и тому подобное.

В качестве вышеуказанных многоатомных спиртов можно использовать, например, трехатомные спирты, такие как глицерин и тому подобное, пятиатомные спирты, такие как арабит, ксилит, адонит и тому подобное, шестиатомные спирты, такие как маннит, сорбит, дульцит и тому подобное, и другие спирты. Из них предпочтительными являются шестиатомные спирты и, в частности, подходящим является маннит.

В качестве вышеуказанных одноатомных спиртов можно перечислить, например, метанол, этанол, изопропиловый спирт и тому подобное, и из них предпочтительным является этанол.

В качестве вышеуказанных моносахаридов используют, например, пентозы, такие как арабиноза, ксилоза, рибоза, 2-дезоксирибоза и тому подобное, и гексозы, такие как глюкоза, фруктоза, галактоза, манноза, сорбоза, рамноза, фукоза и тому подобное, и из них предпочтительными являются гексозы.

В качестве вышеуказанных олигосахаридов используют, например, триозы, такие как мальтотриоза, рафиноза и тому подобное, тетрозы, такие как стахиоза и тому подобное, предпочтительными из которых являются триозы.

В качестве производных вышеуказанных моносахаридов используют моносахариды, дисахариды и олигосахариды, например глюкозамин, галактозамин, глюкуроновую кислоту, галактуроновую кислоту и тому подобное.

Можно использовать любую из вышеуказанных аминокислот при условии, что они являются L-аминокислотами, например, такими как глицин, лейцин, аргинин и тому подобное. Из них предпочтительным является L-аргинин.

Указанные агенты, контролирующие осмотическое давление, можно использовать одни или в смеси.

Данные контролирующие осмотическое давление агенты можно использовать в таких концентрациях, чтобы осмотическое давление внешней водной фазы равнялось примерно от 1/50- до примерно 5-кратного, предпочтительно примерно от 1/25- до примерно 3-кратного по отношению к осмотическому давлению физиологического раствора. Когда в качестве агента, контролирующего осмотическое давление, используют маннит, то его концентрация предпочтительно составляет от 0,5 до 1,5%.

В качестве способа удаления органического растворителя используют известный способ или соответствующий способ. Например, можно использовать способ, в котором органический растворитель выпаривают при одновременном перемешивании с помощью мешалки пропеллерного типа или магнитной мешалки, устройства, продуцирующего ультразвуковые волны и тому подобное при нормальном давлении или постепенно уменьшающемся пониженном давлении, способ, в котором органический растворитель выпаривают при одновременном контроле глубины вакуума с использованием роторного испарителя и тому подобное, способ, в котором органический растворитель постепенно удаляют с использованием пленки для диализа и другие способы.

Полученные таким образом микрокапсулы отделяют центрифугированием или фильтрованием, затем прилипшие к поверхности микрокапсул свободное физиологически активное соединение или его соль, оксинафтойную кислоту или ее соль, удерживающее препарат вещество, эмульгатор и тому подобное несколько раз отмывают дистиллированной водой, вновь диспергируют в дистиллированной воде и тому подобное и высушивают вымораживанием.

В способ получения можно добавить агент, предотвращающий коагуляцию, для предупреждения коагуляции частиц друг с другом. В качестве агента, предотвращающего коагуляцию, используют, например, водорастворимые полисахариды, такие как маннит, лактоза, глюкоза, крахмалы (например, кукурузный крахмал и тому подобное) и тому подобное, аминокислоты, такие как глицин и тому подобное, белки, такие как фибрин, коллаген и тому подобное. Из них маннит является наиболее подходящим.

Добавляемое количество агента, предотвращающего коагуляцию, такого как маннит и тому подобное, как правило, составляет от 0 до примерно 24% по массе к общей массе микрокапсул.

После сушки вымораживанием, если необходимо, воду и органический растворитель в микрокапсулах можно удалить нагреванием в условиях, не вызывающих слипания микрокапсул друг с другом при пониженном давлении. Предпочтительно микрокапсулы нагревают при температуре около или несколько выше промежуточной точки стеклования полимера молочной кислоты при определении дифференциальным сканирующим калориметром в условиях возрастания температуры от 10 до 20°С в минуту. Более предпочтительно, когда нагревание проводят при температуре около промежуточной точки стеклования полимера молочной кислоты или в пределах от промежуточной точки стеклования полимера молочной кислоты до температуры примерно на 30°С выше промежуточной точки его стеклования. В частности, когда в качестве полимера молочной кислоты используется полимер молочной кислоты-гликолевой кислоты, нагревание предпочтительно проводят при температуре в пределах примерно от промежуточной точки стеклования до температуры на 10°С выше промежуточной точки стеклования, более предпочтительно при температуре в пределах примерно от промежуточной точки стеклования до температуры на 5°С выше промежуточной точки стеклования.

Несмотря на то что время нагревания варьирует в зависимости от количества микрокапсул и тому подобное, оно составляет примерно от 12 ч до примерно 168 ч, предпочтительно примерно от 24 ч до примерно 120 ч, наиболее предпочтительно примерно от 48 ч до примерно 96 ч, после того как сами микрокапсулы нагреваются до данной температуры.

Метод нагревания особым образом не ограничивается при условии, что микрокапсулы можно однородно нагреть.

В качестве способа высушивания при нагревании используют, например, способ высушивания при нагревании в камере с постоянной температурой, в камере с псевдоожиженным слоем, движущейся камере или сушильной печи, способ высушивания при нагревании микроволнами и тому подобное. Из них предпочтительным является способ высушивания при нагревании в камере с постоянной температурой.

(ii) Способ с эмульсией В/М/В (1)

Вначале получают раствор полимера молочной кислоты или ее соли в органическом растворителе.

Органический растворитель и концентрация полимера молочной кислоты или ее соли в растворе в органическом растворе являются такими же, как в вышеуказанном разделе (I)(i). Когда используют смешанный органический растворитель, то соотношение двух соединений является таким же, как описано в вышеуказанном разделе (I)(i).

Физиологически активное соединение или его соль растворяют или диспергируют в полученном таким образом растворе полимера молочной кислоты или ее соли в органическом растворителе. Затем к раствору в органическом растворителе (масляная фаза), содержащему композицию, состоящую из физиологически активного соединения или его соли и полимера молочной кислоты или ее соли, добавляют раствор оксинафтойной кислоты или ее соли [в качестве растворителя вода, водный раствор спиртов (например, метанола, этанола и тому подобное), водный раствор пиридина, водный раствор диметилацетамида и тому подобное]. Данную смесь эмульгируют известным способом в гомогенизаторе или обработкой ультразвуком и тому подобное с образованием эмульсии В/М.

Затем полученную эмульсию В/М, состоящую из физиологически активного соединения или его соли, оксинафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты или ее соли, добавляют в водную фазу с получением эмульсии В(внутренняя водная фаза)/М(масляная фаза)/В(внешняя водная фаза), затем растворитель в масляной фазе выпаривают с получением микрокапсул. В данной операции объем внешней водной фазы, как правило, составляет примерно от 1- до примерно 10000-кратного, более предпочтительно примерно от 5-кратного до примерно 5000-кратного, наиболее предпочтительно примерно от 10-кратного до примерно 2000-кратного по отношению к объему масляной фазы.

Во внешнюю водную фазу можно добавить вышеуказанный эмульгатор, контролирующий осмотическое давление агент, и последующий способ получения является таким же, как описано в разделе (I)(i).

(iii) Способ с эмульсией В/М/В (2)

Вначале готовят раствор оксинафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты или ее соли в органическом растворителе и полученный таким образом раствор в органическом растворителе обозначают как масляную фазу. Данный способ получения является таким же, как описан в вышеуказанном разделе (I)(i). Альтернативно оксинафтойную кислоту или ее соль и полимер молочной кислоты можно приготовить по отдельности в виде растворов в органическом растворителе перед их смешиванием. Концентрация полимера молочной кислоты в растворе в органическом растворителе варьирует в зависимости от молекулярной массы полимера молочной кислоты и вида органического растворителя, и когда в качестве органического растворителя используют, например, дихлорметан, то концентрация, как правило, составляет примерно от 0,5 до примерно 70% по массе, более предпочтительно примерно от 1 до примерно 60% по массе, наиболее предпочтительно примерно от 2 до примерно 50% по массе.

Затем готовят раствор или дисперсию физиологически активного соединения или его соли [в качестве растворителя вода, смеси воды и спиртов (например, метанола, этанола или тому подобное) и тому подобное].

Добавляемая концентрация физиологически активного соединения или его соли, как правило, составляет от 0,001 мг/мл до 10 г/мл, более предпочтительно от 0,1 мг/мл до 5 г/мл, более предпочтительно от 10 мг/мл до 3 г/мл.

Когда вышеуказанное физиологически активное соединение имеет основную группу, такую как аминогруппа, то соли физиологически активного соединения включают соль с неорганической кислотой (также называемый неорганической свободной кислотой) (например, карбоновая кислота, бикарбоновая кислота, соляная кислота, серная кислота, азотная кислота, борная кислота и т.д.) и органической кислотой (также называемой свободной органической кислотой) (например, янтарная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, трифторуксусная кислота и т.д.).

Когда физиологически активное соединение имеет кислотную группу, такую как карбоксильная группа, то соли физиологически активного соединения включают соль с неорганическим основанием (также называемым неорганическим свободным основанием) (например, щелочные металлы, такие как натрий, калий и тому подобное, щелочно-земельные металлы, такие как кальций, магний и тому подобное) и органическим основанием (также называемым органическим свободным основанием) (например, органические амины, такие как триэтиламин и тому подобное, основные аминокислоты, такие как аргинин и тому подобное). Кроме того, физиологически активные пептиды могут образовать комплексное соединение с металлом (например, комплекс с медью, комплекс с цинком и тому подобное). Когда физиологически активное соединение представляет производное LH-RH, то особенно предпочтительно добавить уксусную кислоту.

В качестве вспомогательного средства для растворения и стабилизатора можно использовать известные соединения. Можно проводить нагревание, встряхивание, перемешивание и тому подобное для растворения и диспергирования физиологически активного соединения и использовать добавки до той степени, при которой не нарушается активность, и полученный таким образом водный раствор называют внутренней водной фазой.

Полученные внутреннюю водную фазу и масляную фазу, описанные выше, эмульгируют известным методом, таким как в гомогенизаторе или обработкой ультразвуком и тому подобное, с получением эмульсии В/М.

Объем смешанной масляной фазы равняется примерно от 1- до 1000-кратного, предпочтительно от 2- до 100-кратного, более предпочтительно примерно от 3- до 10-кратного по отношению к объему внутренней водной фазы.

Вязкость полученной эмульсии В/М, как правило, равняется примерно от 10 до 10000 сантипуаз, предпочтительно примерно от 100 до примерно 5000 сантипуаз, наиболее предпочтительно примерно от 500 до 2000 сантипуаз при температуре от 12 до 25°С.

Затем полученную эмульсию В/М, состоящую из физиологически активного соединения или его соли, оксинафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты или ее соли, добавляют в водную фазу с образованием эмульсии В(внутренняя водная фаза)/М(масляная фаза)/В(внешняя водная фаза), затем растворитель в масляной фазе выпаривают или диспергируют во внешней водной фазе с получением микрокапсул. В данной операции объем внешней водной фазы, как правило, равняется примерно от 1-кратного до примерно 10000-кратного, более предпочтительно примерно от 5-кратного до примерно 5000-кратного, наиболее предпочтительно примерно от 10-кратного до примерно 2000-кратного по отношению к объему масляной фазы.

Во внешнюю водную фазу можно добавить вышеуказанный эмульгатор, агент, контролирующий осмотическое давление, и последующий способ получения является аналогичным описанному в разделе (I)(i).

(II) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ ФАЗ

Когда микрокапсулы получают данным способом, то постепенно добавляют агент для коацервации при одновременном перемешивании в раствор в органическом растворителе, содержащий композицию, состоящую из физиологически активного соединения или его соли, описанного в разделе (I) в способе высушивания в воде, оксинафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты или ее соли, для осаждения и затвердевания микрокапсул. Количество агента для коацервации составляет примерно от 0,01- до примерно 1000-кратного, предпочтительно примерно от 0,05- до примерно 500-кратного, наиболее предпочтительно примерно от 0,1- до примерно 200-кратного по отношению к объему масляной фазы.

Агент для коацервации особым образом не ограничивается при условии, что он выбран из соединений на основе полимеров, минерального масла или растительного масла, которые смешиваются с органическим растворителем, но не растворяют физиологически активное соединение или его соль, оксинафтойную кислоту или ее соль и полимер молочной кислоты или ее соли. В частности, используют, например, силиконовое масло, кунжутное масло, соевое масло, кукурузное масло, масло семян хлопчатника, кокосовое масло, льняное масло, минеральное масло, н-гексан, н-гептан и тому подобное. Их можно использовать в виде смеси двух или более агентов.

Полученные таким образом микрокапсулы выделяют, затем несколько раз промывают гептаном для удаления агента для коацервации и тому подобное, но не композицию, состоящую из физиологически активного соединения или его соли, оксинафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты или ее соли, и остаток высушивают при пониженном давлении. Альтернативно промывание проводят таким же образом, как описано в разделе (I)(i) в вышеуказанном способе высушивания в воде, затем высушивают вымораживанием, далее высушивают при нагревании.

(III) СПОСОБ ВЫСУШИВАНИЯ РАСПЫЛЕНИЕМ

Для получения микрокапсул данным методом раствор в органическом растворителе, содержащий физиологически активное соединение или его соль, оксинафтойную кислоту или ее соль и полимер молочной кислоты или ее соли, описанный в разделе (I) в вышеуказанном способе высушивания в воде, распыляют в сушильной камере распылительной сушки (устройство для высушивания распылением) с использованием распылительного сопла и органический растворитель в микронизированных жидких каплях выпаривают в течение очень короткого периода времени с получением микрокапсул. В качестве такого распылительного сопла можно использовать сопло с двумя жидкостями, сопло высокого давления и ротационное дисковое сопло и тому подобное. После этого, если необходимо, можно провести промывание таким образом, как в вышеуказанном способе высушивания в воде (I), затем высушивают вымораживанием, далее высушивают при нагревании.

Касательно иной формы агента, чем вышеуказанные микрокапсулы, то раствор в органическом растворителе, содержащий физиологически активное соединение или его соль, оксинафтойную кислоту и полимер молочной кислоты или ее соли, описанный в способе высушивания в воде в способе получения микрокапсул (I), можно высушить до твердого состояния выпариванием органического растворителя или воды при одновременной регуляции глубины вакуума с использованием роторного испарителя и тому подобное, затем размельчить с помощью струйной мельницы и тому подобное с получением мелких частиц (также называемых микрочастицами).

Затем мелко измельченные частицы можно промыть таким же образом, как описано в способе высушивания в воде в способе получения микрокапсул (I), затем высушивать вымораживанием, далее высушивать при нагревании.

Полученные таким образом микрокапсулы или мелкий порошок могут обеспечить высвобождение лекарственного препарата, соответствующее скорости разрушения использованного полимера молочной кислоты или полимера молочной кислоты-гликолевой кислоты.

Затем в качестве примера будет приведен способ получения композиции с регулируемым высвобождением, содержащей оксинафтоат, который представляет физиологически активное соединение по настоящему изобретению. В способе получения предпочтительно используют физиологически активный пептид в качестве физиологически активного соединения.

(IV) ДВУХСТАДИЙНЫЙ СПОСОБ

Физиологически активное соединение или его соль добавляют в раствор оксинафтойной кислоты или ее соли в органическом растворителе таким образом, чтобы удовлетворялось массовое соотношение, указанное в вышеупомянутом определении составляющего количества для физиологически активного соединения, для получения раствора в органическом растворителе, содержащего оксинафтоат физиологически активного соединения.

Данный органический растворитель является таким же, как описан в разделе (I)(i). Когда используют смешанный органический растворитель, то соотношение двух растворителей является таким же, как описано в вышеуказанном разделе (I)(i).

В качестве способа удаления органического растворителя для осаждения композиции, содержащей оксинафтоат, который в данном случае является физиологически активным соединением, используют способ, известный сам по себе, или соответствующий способ. Например, можно использовать способ, в котором органический растворитель выпаривают при одновременном контроле глубины вакуума с помощью роторного испарителя и тому подобное.

Полученный таким образом раствор в органическом растворителе композиции, содержащей оксинафтоат, который является физиологически активным соединением, готовят вновь, и в результате можно получить композицию с регулируемым высвобождением (микросферы из мелких частиц).

В качестве органического растворителя используют, например, галогенированные углеводороды (например, дихлорметан, хлороформ, дихлорэтан, трихлорэтан, четыреххлористый углерод и тому подобное), простые эфиры (например, этиловый эфир, изопропиловый эфир и тому подобное), эфиры жирных кислот (например, этилацетат, бутилацетат и тому подобное), ароматические углеводороды (например, бензол, толуол, ксилол и тому подобное) и тому подобное. Их можно использовать в смеси в соответствующей пропорции. Из них предпочтительными являются галогенированные углеводороды, и наиболее подходящим является дихлорметан.

Затем раствор в органическом растворителе, содержащий оксинафтоат физиологически активного соединения, добавляют в водную фазу с получением эмульсии М(масляная фаза)/В(водная фаза), затем растворитель в масляной фазе выпаривают с получением микросфер. В данном случае объем водной фазы, как правило, равняется примерно от 1- до примерно 10000-кратного, более предпочтительно примерно от 5-кратного до примерно 5000-кратного, наиболее предпочтительно примерно от 10-кратного до примерно 2000-кратного по отношению к объему масляной фазы.

Во внешнюю водную фазу можно добавить вышеуказанный эмульгатор, контролирующий осмотическое давление агент, и последующий способ получения является таким же, как описан в разделе (I)(i).

В качестве способа удаления органического растворителя используют известный способ или соответствующий способ. Например, можно использовать способ, в котором органический растворитель выпаривают при одновременном перемешивании с помощью мешалки пропеллерного типа или магнитной мешалки и тому подобное при нормальном давлении или постепенно уменьшающемся пониженном давлении, способ, в котором органический растворитель выпаривают при одновременном контроле глубины вакуума с использованием роторного испарителя и тому подобное, и другие способы.

Полученные таким образом микросферы отделяют центрифугированием или фильтрованием, затем прилипшие к поверхности микросфер свободное физиологически активное соединение, оксинафтойную кислоту, эмульгатор и тому подобное несколько раз отмывают дистиллированной водой, вновь диспергируют в дистиллированной воде и тому подобное и высушивают вымораживанием.

В способе получения можно добавить агент, предотвращающий коагуляцию, для предупреждения коагуляции частиц друг с другом. В качестве агента, предотвращающего коагуляцию, используют, например, водорастворимые полисахариды, такие как маннит, лактоза, глюкоза, крахмалы (например, кукурузный крахмал и тому подобное) и тому подобное, аминокислоты, такие как глицин и тому подобное, белки, такие как фибрин, коллаген и тому подобное. Из них маннит является наиболее подходящим.

Затем после сушки вымораживанием, если необходимо, воду и органический растворитель в микросферах можно удалить нагреванием в условиях, не вызывающих слипания микрокапсул друг с другом при пониженном давлении.

Несмотря на то что время нагревания варьирует в зависимости от количества микросфер и тому подобное, оно составляет примерно от 12 ч до примерно 168 ч, предпочтительно примерно от 24 ч до примерно 120 ч, наиболее предпочтительно примерно от 48 ч до примерно 96 ч, после того как сами микросферы нагреваются до данной температуры.

Способ нагревания особым образом не ограничивается при условии, что микросферы можно однородно нагреть.

В качестве метода высушивания при нагревании используют, например, метод высушивания при нагревании в камере с постоянной температурой, камере с псевдоожиженным слоем, движущейся камере или сушильной печи, метод высушивания при нагревании микроволнами и тому подобное. Из них предпочтительным является метод высушивания при нагревании в камере с постоянной температурой. Полученные микросферы находятся в виде относительно однородных сфер, имеют небольшое сопротивление при инъекционном введении и не забивают иглу. Поскольку можно использовать тонкую иглу, то инъекция у пациента является безболезненной.

(V) ОДНОСТАДИЙНЫЙ СПОСОБ

Физиологически активное соединение или его соль добавляют в раствор оксинафтойной кислоты или ее соли в органическом растворителе таким образом, чтобы удовлетворялось массовое соотношение, указанное в вышеупомянутом определении составляющего количества для физиологически активного соединения, для получения раствора в органическом растворителе, содержащего оксинафтоат физиологически активного соединения, и получают композицию с регулируемым высвобождением (микросферы или мелкие частицы).

Данный органический растворитель является таким же, как описано в разделе (I)(i). Когда используют смешанный органический растворитель, то их соотношение является таким же, как описано в вышеуказанном разделе (I)(i).

Затем раствор в органическом растворителе, содержащий оксинафтоат физиологически активного соединения, добавляют в водную фазу с получением эмульсии М(масляная фаза)/В(водная фаза), затем растворитель в масляной фазе выпаривают с получением микросфер. В данном случае объем водной фазы, как правило, равняется примерно от 1- до примерно 10000-кратного, более предпочтительно примерно от 5-кратного до примерно 5000-кратного, наиболее предпочтительно примерно от 10-кратного до примерно 2000-кратного по отношению к объему масляной фазы.

Во внешнюю водную фазу можно добавить вышеуказанный эмульгатор, агент, контролирующий осмотическое давление, и последующий способ получения является таким же, как описан в разделе (IV).

Композиция по настоящему изобретению может иметь любую форму, такую как микросферы, микрокапсулы, мелкие частицы (микрочастицы) и тому подобное, микрокапсулы являются подходящими.

Композицию с регулируемым высвобождением по настоящему изобретению можно вводить как саму по себе или ее можно использовать в качестве исходного соединения и на его основе готовить различные лекарственные формы перед введением в виде инъекционного или имплантируемого препарата внутримышечно, подкожно, в органы и тому подобное, препаратов для применения через слизистую в нос, прямую кишку, матку и тому подобное, препаратов для перорального введения (например, капсул (твердых капсул, мягких капсул и тому подобное), твердых препаратов, таких как гранулы, порошок и тому подобное, жидких препаратов, таких как сироп, эмульсия, суспензия и тому подобное) и тому подобное.

Например, при использовании композиций с регулируемым высвобождением по настоящему изобретению в виде инъекционного раствора, раствор можно приготовить в виде водной суспензии с диспергирующим агентом (например, поверхностно-активными веществами такими, как Твин-80, НСО-60 и тому подобное, полисахаридами, такими как гиалуронат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, альгинат натрия и тому подобное), консервантами (например, метилпарабеном, пропилпарабеном и тому подобное), изотонирующим агентом (например, хлоридом натрия, маннитом, сорбиом, глюкозой, пролином и тому подобное) или диспергировать с растительным маслом, таким как кунжутное масло, кукурузное масло и тому подобное, с получением масляной суспензии, которые можно непосредственно использовать в виде инъекции с регулируемым высвобождением.

Размер частиц композиции с регулируемым высвобождением по настоящему изобретению при использовании в виде суспензии для инъекции может преимущественно находиться в пределах, удовлетворяющих степени дисперсии и прохождению через иглу, и составляет, например, примерно от 0,1 до 300 мкм, предпочтительно примерно от 0,5 до 150 мкм, наиболее предпочтительно примерно от 1 до 100 мкм, в качестве среднего размера частиц.

Для стерилизации композиции по настоящему изобретению можно перечислить метод проведения всего процесса получения в стерильных условиях, метод стерилизации -лучами, метод добавления консерванта и тому подобное, но методы стерилизации не ограничиваются перечисленными.

Композицию с регулируемым высвобождением по настоящему изобретению можно использовать в качестве безопасного лекарственного препарата и тому подобное для млекопитающих (например, человека, крупного рогатого скота, свиней, собак, кошек, мышей, крыс, кроликов и тому подобное), поскольку она обладает низкой токсичностью.

Доза композиции с регулируемым высвобождением по настоящему изобретению в значительной мере различается в зависимости от вида и содержания физиологически активного соединения, которое является основным действующим препаратом, лекарственной формы, продолжительности высвобождения физиологически активного соединения, целевых заболеваний, целевых животных и тому подобное, и преимущественно может представлять эффективное количество физиологически активного соединения. Доза для введения физиологически активного соединения, которое представляет основной лекарственный препарат, в случае, когда композиция с регулируемым высвобождением представляет препарат для высвобождения в течение 6 месяцев, предпочтительно выбрана из примерно от 0,01 до 10 мг/кг, более предпочтительно примерно от 0,05 до 5 мг/кг для взрослого человека.

Доза композиции с регулируемым высвобождением для введения выбрана предпочтительно из примерно от 0,05 до 50 мг/кг, более предпочтительно примерно от 0,1 до 30 мг/кг для взрослого человека.

Частота введения может быть соответствующим образом выбрана в зависимости от вида и содержания физиологически активного соединения, которое является основным действующим препаратом, лекарственной формы, продолжительности высвобождения физиологически активного соединения, целевых заболеваний, целевых животных и тому подобное, и составляет, например, один раз в несколько недель, раз в месяц, один раз в несколько месяцев (например, 3, 4 или 6 месяцев и тому подобное) и тому подобное.

Композицию с регулируемым высвобождением по настоящему изобретению можно использовать в качестве профилактического или лечебного средства в отношении различных заболеваний в зависимости от вида входящего в ее состав физиологически активного соединения, и в случае когда физиологически активное соединение представляет, например, производное LH-RH, то ее можно использовать в качестве препарата для профилактики или лечения зависимых от гормонов заболеваний, в частности, зависимых от половых гормонов заболеваний, таких как зависимые от половых гормонов опухоли (например, рак простаты, рак матки, рак молочной железы, опухоли гипофиза и тому подобное), гиперплазии простаты, эндометриоза, миомы матки, преждевременного полового созревания, дисменореи, аменореи, предменструального синдрома, синдрома ячеистого яичника и тому подобное и в качестве препарата для профилактики рецидива рака молочной железы после операции по поводу рака молочной железы в период пременопаузы, в качестве препарата для профилактики или лечения болезни Альцгеймера и иммунодефицита и тому подобное, и в качестве средства контрацепции (или когда используется реактивное действие после отмены препаратов, профилактики или лечения бесплодия) и тому подобное. Кроме того, композицию с регулируемым высвобождением по настоящему изобретению можно также использовать в качестве препарата для профилактики или лечения доброкачественных или злокачественных опухолей, которые зависят от LH-RH, но не зависят от половых гормонов.

Следовательно, можно проводить профилактику или лечить зависимые от гормонов заболевания, в частности, зависимые от половых гормонов опухоли (например, рак простаты, рак матки, рак молочной железы, опухоли гипофиза и тому подобное), зависимые от половых гормонов заболевания, такие как простатомегалия, эндометриоз, гистеромиома, преждевременное половое созревание, дисменорея, аменорея, предменструальный синдром, синдром ячеистого яичника и тому подобное; и можно предупреждать беременность введением млекопитающему эффективной дозы средства для лечения или профилактики по настоящему изобретению, и также можно проводить профилактику рецидив рака молочной железы после проведения операции по поводу рака молочной железы в период пременопаузы.

Последующие примеры и ссылочные примеры проиллюстрируют настоящее изобретение в деталях, и ни коем образом они не ограничивают объем настоящего изобретения.

[Примеры]

Значения среднемассовой молекулярной массы и содержание каждого полимера в последующих примерах и ссылочных примерах представляют значения среднемассовой молекулярной массы по отношению к полистиролу, определение которого проводилось гель-проникающей хроматографией (ГПХ) с использованием одного диспергированного полистирола в качестве стандарта, и по этим данным определяли содержание каждого полимера. Во всех случаях определение проводили на хроматографе для ГПХ высокого давления (производства Tosoh Corp.; HLC-8120 GPC) и на колонках Super H 4000×2 и Super H 2000 (все производства Tosoh Corp.) и использовали в качестве подвижной фазы тетрагидрофуран при скорости потока 0,6 мл/мин. Метод определения основан на показателе дифференциального преломления.

Ссылочный пример А1: синтез полимера молочной кислоты с высокой молекулярной массой

К 230 мл безводного ксилола добавляли 4,1 мл 1,0 моль/л раствора диэтилцинка в гексане, 1,35 г трет-бутиллактата и 230 г DL-лактида, и проводили реакцию полимеризации при температуре 120-130°С в течение примерно 2 ч. После завершения реакции в реакционный раствор выливали 120 мл дихлорметана и к этому добавляли 230 мл трифторуксусной кислоты для снятия защиты. После завершения реакции в реакционный раствор добавляли 300 мл дихлорметана, затем реакционный раствор выливали в 2800 мл изопропилового эфира для осаждения предназначаемого соединения, затем повторяли осаждение со смесью дихлорметан/изопропиловый эфир с получением полимера молочной кислоты со среднемассовой молекулярной массой, равной примерно 40000.

Ссылочный пример В1:

Полученный в ссылочном примере А1 полимер растворяли в 600 мл дихлорметана и промывали водой до тех пор, пока раствор не становился нейтральным, затем добавляли 70 г 90% водного раствора молочной кислоты, и соединения взаимодействовали при 40°С. Когда среднемассовая молекулярная масса растворенного в реакционном растворе полимера достигала примерно 20000, раствор охлаждали до комнатной температуры и вливали 600 мл дихлорметана для остановки реакции, затем раствор промывали водой, пока реакционный раствор не становился нейтральным. После промывания водой реакционный раствор концентрировали и высушивали с получением полимера молочной кислоты. Количество концевых карбоксильных групп в полученном полимере молочной кислоты составляло примерно 80 мкмоль на 1 г полимера, и содержание полимеров с молекулярной массой 5000 или ниже равнялось 7,29 мас.%.

Ссылочный пример С1:

Полученный в ссылочном примере А1 полимер растворяли в 600 мл дихлорметана и промывали водой до тех пор, пока раствор не становился нейтральным, затем добавляли 70 г 90% водного раствора молочной кислоты, и взаимодействие осуществляли при 40°С. Когда среднемассовая молекулярная масса растворенного в реакционном растворе полимера достигала примерно 20000, раствор охлаждали до комнатной температуры и вливали 600 мл дихлорметана для остановки реакции, затем раствор промывали водой, пока реакционный раствор не становился нейтральным, затем реакционный раствор добавляли по каплям в 2800 мл изопропилового эфира для осаждения предназначаемого полимера молочной кислоты. Полученный декантированием осадок растворяли в 600 мл дихлорметана, затем концентрировали и высушивали с получением 160 г полимера молочной кислоты. Количество концевых карбоксильных групп полученного полимера молочной кислоты составляло 70 мкмоль на 1 г полимера. Среднемассовая молекулярная масса использованного полимера молочной кислоты с более высокой молекулярной массой, среднемассовая молекулярная масса полимера молочной кислоты после гидролиза, среднемассовая молекулярная масса полученного предназначаемого полимера молочной кислоты и молекулярные фракции представлены в таблице 1.

Ссылочные примеры С2-6:

Полимеры молочной кислоты по настоящему изобретению получали таким же образом, как в ссылочном примере С1. Среднемассовая молекулярная масса использованного полимера молочной кислоты с более высокой молекулярной массой, среднемассовая молекулярная масса полимера молочной кислоты после гидролиза, среднемассовая молекулярная масса полученного предназначаемого полимера молочной кислоты и молекулярные фракции представлены в таблице 1.

Таблица 1
		Ссылочный пример С
		1	2	3	4	5	6
Молекулярная масса полимера молочной кислоты с более высокой молекулярной массой		40500	43600	40400	43300	38600	55000
Молекулярная масса после гидролиза		22200	22200	22700	22200	18600	27200
Молекулярная масса полученного полимера молочной кислоты		22900	22200	21900	22300	19400	28200
Молекулярная масса фракций (%)	1˜1000	0.03	0.07	0.00	0.01	0.08	0.04
	1˜3000	0.95	1.12	0.87	0.09	1.45	0.62
	1˜5000	3.86	4.17	3.89	3.92	4.89	2.50

Как становится очевидным из данных таблицы 1, полимер молочной кислоты по настоящему изобретению, полученный способом по настоящему изобретению, имеет фракцию полимеров с молекулярной массой 5000 или ниже на уровне примерно 5% по массе или ниже, фракцию полимеров с молекулярной массой 3000 или ниже на уровне примерно 1,5% по массе или ниже и фракцию полимеров с молекулярной массой 1000 или ниже на уровне 0,1% по массе или ниже.

[Пример А] Композиция, содержащая оксинафтойную кислоту

Пример А1

Смешивали раствор, полученный растворением 144,4 г полимера DL-молочной кислоты (среднемассовая молекулярная масса: 22500, количество карбоксильных групп по данным количественного определения метки: 66,7 мкмоль/г) в 111,7 г дихлорметана, и 147,2 г раствора, полученного растворением 7,5 г 3-окси-2-нафтойной кислоты в 175,1 г дихлорметана и 13,5 г этанола, и нагревали до 28,7°С. Взвешивали порцию в 274,4 г данного раствора в органическом растворителе и смешивали с водным раствором, полученным растворением 24,89 г ацетата пептида А в 23,47 г дистиллированной воды и нагревали до 54,5°С, затем смесь перемешивали в течение 5 мин для грубого эмульгирования, затем эмульгировали с использованием гомогенизатора при 10046 об/мин в течение 5 мин с образованием эмульсии В/М. Затем данную эмульсию В/М охлаждали до 15,0°С, затем выливали в 25 л 0,1% водного раствора (мас./мас.) поливинилового спирта (EG-40 производства Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.), заранее охлажденного до 15,0°С в течение 3 мин 26 сек, и перемешивали при 7000 об/мин с использованием HOMOMIC LINE FLOW (производства Tokushu Kika K.K.) с получением эмульсии В/М/В. Данную эмульсию В/М/В выдерживали в течение 30 мин примерно при 15°С, затем перемешивали в течение 2,5 ч без контроля температуры для выпаривания дихлорметана и этанола или диспергирования дихлорметана и этанола во внешней водной фазе, вызывая отвержение масляной фазы, затем просеивали через сито с размером пор 75 мкм, микрокапсулы постоянно осаждались при 2000 об/мин с использованием центробежного сепаратора (Н-600S, производства Kokusanenshinki) и собирали осажденные микрокапсулы. Собранные микрокапсулы вновь диспергировали в небольшом количестве дистиллированной воды, просеивали через сито с размером пор 90 мкм, затем к этому добавляли 15,4 г маннита для растворения, затем раствор высушивали вымораживанием с получением порошка. Полученная масса порошка из микрокапсул составляла 101,6 г, что соответствует выходу, равному 72,7%, и содержание пептида А равнялось 15,88%, а содержание 3-окси-2-нафтойной кислоты - 2,82%.

Экспериментальный пример А1

Примерно 45 мг микрокапсул, описанных в примере А1, диспергировали в 0,3 мл среды для дисперсии (дистиллированная вода, содержащая 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 г полисорбата-80 и 15 мг маннита) и дисперсию вводили через иглу 22G семидневным крысам самцам SD подкожно в область спины. В определенное время после введения крыс убивали и извлекали оставшиеся в месте введения микрокапсулы и количественно определяли пептид А, содержащийся в них, и эту величину делили на исходное содержание с получением относительного остаточного содержания, представленного в таблице 2.

Таблица 2
Относительное остаточное содержание: пептид А
Через один день	92,1%
Через одну неделю	87.4%
Через две недели	78.1%
Через четыре недели	64.8%
Через восемь недель	51.5%
Через двенадцать недель	38.7%
Через шестнадцать недель	25.6%
Через двадцать недель	11.8%
Через двадцать шесть недель	2.0%

Как становится очевидным из данных таблицы 2, микрокапсулы из примера А1, полученные добавлением 3-окси-2-нафтойной кислоты, могут содержать физиологически активное соединение в высокой концентрации, даже если их получают в объеме примерно 125 г, и одновременно имеется выраженный эффект подавления интенсивного первоначального высвобождения физиологически активного соединения. Кроме того, физиологически активное соединение высвобождается из микрокапсул с постоянной скоростью в течение очень продолжительного периода времени.

[Пример В] Композиция, не содержащая оксинафтойную кислоту

Пример В1

4,00 г полимера DL-молочной кислоты (среднемассовая молекулярная масса: 18300, содержание карбоксильных групп по данным количественного определения метки: 86 мкмоль/г) растворяли в 6,77 г дихлорметане с получением раствора. Весь этот раствор в органическом растворителе взвешивали и смешивали с водным раствором, полученным растворением 1,04 г ацетата пептида А в 0,92 г дистиллированной воды, и нагревали до 60°С, затем смесь эмульгировали на гомогенизаторе при 25000 об/мин в течение 20 сек с образованием эмульсии В/М. Затем данную эмульсию В/М выливали в 1 л 0,1% водного раствора (мас./мас.) поливинилового спирта (EG-40, производства Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.), предварительно выдержанного при 18,0°С в течение 20 сек, и перемешивали при 7000 об/мин с использованием гомогенезатора с получением эмульсии В/М/В. Данную эмульсию В/М/В перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч для выпаривания дихлорметана и этанола или диспергирования дихлорметана и этанола во внешней водной фазе, вызывая отвержение масляной фазы, затем просеивали через сито с размером пор 75 мкм, затем промывали чистой водой и микрокапсулы осаждали с использованием центробежного сепаратора (05PR-22: HITACHI) при 2500 об/мин в течение 5 мин и собирали осажденные микрокапсулы. Собранные микрокапсулы вновь диспергировали в небольшом количестве дистиллированной воды и к этому добавляли 0,50 г маннита для растворения, затем раствор высушивали вымораживанием с получением порошка. Выделенная масса порошка из микрокапсул составляла 2,12 г, что соответствует выходу, равному 38,2%, и содержание пептида А составляло 12,98%.

Экспериментальный пример В2

4,40 г полимера DL-молочной кислоты (среднемассовая молекулярная масса: 18300, количество карбоксильных групп по данным количественного определения метки: 86 мкмоль/г) растворяли в 7,40 г дихлорметана с получением раствора. Весь этот раствор в органическом растворителе взвешивали и смешивали с водным раствором, полученным растворением 0,60 г ацетата пептида А в 0,552 г дистиллированной воды и нагревали до 60°С, затем смесь эмульгировали на гомогенизаторе при 25000 об/мин в течение 20 сек с образованием эмульсии В/М. Затем данную эмульсию В/М выливали в 1 л 0,1% водного раствора (мас./мас.) поливинилового спирта (EG-40, производства Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.), предварительно выдержанного при 18,0°С в течение 20 сек, и перемешивали при 7000 об/мин с использованием гомогенизатора с получением эмульсии В/М/В. Данную эмульсию В/М/В перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч для выпаривания дихлорметана и этанола или диспергирования дихлорметана и этанола во внешней водной фазе, вызывая отвержение масляной фазы, затем просеивали через сито с размером пор 75 мкм, затем промывали чистой водой и микрокапсулы осаждали с использованием центробежного сепаратора (05PR-22: HITACHI) при 2500 об/мин в течение 5 мин и собирали осажденные микрокапсулы. Собранные микрокапсулы вновь диспергировали в небольшом количестве дистиллированной воды и к этому добавляли 0,50 г маннита для растворения, затем раствор высушивали вымораживанием, затем высушивали в вакууме при 50°С в течение 48 ч с получением порошка. Выделенная масса порошка из микрокапсул составляла 3,04 г, что соответствует выходу, равному 55,3%, и содержание пептида А составляло 9,21%.

Экспериментальный пример В3

8,10 г полимера DL-молочной кислоты (среднемассовая молекулярная масса: 21900; содержание карбоксильных групп по данным количественного определения метки: 75,8 мкмоль/г) растворяли в 14,15 г дихлорметана с получением раствора. Весь этот раствор в органическом растворителе взвешивали и смешивали с водным раствором, полученным растворением 0,93 г ацетата пептида А в 0,95 г дистиллированной воды и нагревали до 60°С, затем смесь эмульгировали на гомогенизаторе при 25000 об/мин в течение 20 сек с образованием эмульсии В/М. Затем данную эмульсию В/М выливали в 1 л 0,1% водного раствора (мас./мас.) поливинилового спирта (EG-40, производства Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.), предварительно выдержанного при 18,0°С в течение 20 сек, и перемешивали при 7000 об/мин с использованием гомогенизатора с получением эмульсии В/М/В. Данную эмульсию В/М/В перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч для выпаривания дихлорметана и этанола или диспергирования дихлорметана и этанола во внешней водной фазе, вызывая отвержение масляной фазы, затем просеивали через сито с размером пор 75 мкм, затем промывали чистой водой и микрокапсулы осаждали с использованием центробежного сепаратора (05PR-22: HITACHI) при 2500 об/мин в течение 5 мин и собирали осажденные микрокапсулы. Собранные микрокапсулы вновь диспергировали в небольшом количестве дистиллированной воды и к этому добавляли 1,00 г маннита для растворения, затем раствор высушивали вымораживанием, затем высушивали в вакууме примерно при 50°С в течение 30 ч с получением порошка. Выделенная масса порошка из микрокапсул составляла 5,44 г, что соответствует выходу, равному 54,17%, и содержание пептида А составляло 8,03%.

Экспериментальный пример В4

205,5 г полимера DL-молочной кислоты (среднемассовая молекулярная масса: 21400; содержание карбоксильных групп по данным количественного определения метки: 76,1 мкмоль/г) растворяли в 354,3 г дихлорметана с получением раствора, который профильтровывали под давлением через фильтр с размером пор 0,2 мкм (Emeflow, DFA4201FRP), температуру выдерживали при 28,8°С. Взвешивали 380,4 г данного раствора в органическом растворителе и смешивали с водным раствором, полученным растворением 16,11 г ацетата пептида А в 16,22 г дистиллированной воды, и нагревали до 55,4°С, и смесь грубо эмульгировали в течение 1 мин, затем эмульгировали с использованием минимиксера при 10150 об/мин в течение 2 мин с образованием эмульсии В/М. Затем данную эмульсию В/М охлаждали до 18°С, затем выливали в 25 л 0,1% (мас./мас.) водного раствора поливинилового спирта (EG-40 производства Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.), предварительно выдержанного при 18,7°С в течение 3 мин 10 сек и перемешивали при 7001 об/мин с использованием HOMOMIC LINE FLOW (производства Tokushu Kika K.K.) с получением эмульсии В/М/В. Данную эмульсию В/М/В выдерживали в течение 30 мин примерно при 18,5°С, затем перемешивали в течение 2 ч 30 мин без контроля температуры для выпаривания дихлорметана и этанола или диспергирования дихлорметана и этанола во внешней водной фазе, вызывая отвержение масляной фазы, затем просеивали через сито с размером пор 75 мкм, микрокапсулы непрерывно осаждали с использованием центробежного сепаратора (Н-600S; отечественный центробежный сепаратор) и собирали осажденные микрокапсулы. Собранные микрокапсулы вновь диспергировали в небольшом количестве дистиллированной воды и просеивали через сито с размером пор 90 мкм, затем к этому добавляли 18,85 г маннита для растворения, затем раствор высушивали вымораживанием с получением порошка. Выделенная масса порошка из микрокапсул составляла 117,6 г, что соответствует выходу, равному 68,54% и содержание пептида А составляло 7,76%.

Экспериментальный пример В5

4,80 г полимера DL-молочной кислоты (среднемассовая молекулярная масса: 28800; количество карбоксильных групп по данным количественного определения метки: 78,1 мкмоль/г) растворяли в 7,8 г дихлорметана с получением раствора. Весь этот раствор в органическом растворителе взвешивали и смешивали с водным раствором, полученным растворением 1,20 г ацетата пептида А в 1,2 г дистиллированной воды и смесь эмульгировали на гомогенизаторе при 25000 об/мин в течение 20 сек с образованием эмульсии В/М. Затем данную эмульсию В/М выливали в 1,2 л 0,1% водного раствора (мас./мас.) поливинилового спирта (EG-40, производства Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.), предварительно выдержанного при 15,0°С в течение 20 сек, и перемешивали при 7000 об/мин с использованием гомогенизатора с получением эмульсии В/М/В. Данную эмульсию В/М/В перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч для выпаривания дихлорметана и этанола или диспергирования дихлорметана и этанола во внешней водной фазе, вызывая отвержение масляной фазы, затем просеивали через сито с размером пор 75 мкм, затем промывали чистой водой и микрокапсулы осаждали с использованием центробежного сепаратора (05PR-22: HITACHI) при 2200 об/мин в течение 5 мин и собирали осажденные микрокапсулы. Собранные микрокапсулы вновь диспергировали в небольшом количестве дистиллированной воды и к этому добавляли 0,30 г маннита для растворения, затем раствор высушивали вымораживанием с получением порошка. Выделенная масса порошка из микрокапсул составляла 3,42 г, что соответствует выходу, равному 53,56%, и содержание пептида А составляло 11,08%.

Экспериментальный пример В1

Примерно 69 мг микрокапсул, описанных в примере В1, диспергировали в 0,3 мл среды для дисперсии (дистиллированная вода, содержащая 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата-80 и 15 мг маннита) и дисперсию вводили через иглу 22G крысам самцам в возрасте 7 дней SD подкожно в области спины. В определенное время после введения крыс умерщвляли и извлекали оставшиеся в месте введения микрокапсулы, и количественно определяли пептид А, содержащийся в них, и эту величину делили на исходное содержание с получением относительного остаточного содержания, представленного в таблице 3.

Таблица 3
Относительное остаточное содержание: пептид А
Через один день	89.7%

Как следует из данных таблицы 3, микрокапсулы из примера В1, полученные при включении пептида А, могут в высокой концентрации содержать физиологически активное соединение и одновременно эффективно подавлять интенсивное первоначальное выделение физиологически активного соединения. Кроме того, при той же композиции из другой партии данные микрокапсулы высвобождали физиологически активное соединение с постоянной скоростью в течение очень продолжительного периода времени.

Экспериментальный пример В2

Примерно 73 мг микрокапсул, описанных в примере В2, диспергировали в 0,3 мл среды для дисперсии (дистиллированная вода, содержащая 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата-80 и 15 мг маннита) и дисперсию вводили через иглу 22G крысам самцам в возрасте 7 дней SD подкожно в области спины. В определенное время после введения крыс умерщвляли и извлекали оставшиеся в месте введения микрокапсулы и количественно определяли пептид А, содержащийся в них, и эту величину делили на исходное содержание с получением относительного остаточного содержания, представленного в таблице 4.

Таблица 4
Относительное остаточное содержание: пептид А
Через один день	95.2%
Через две недели	86.2%

Как следует из данных таблицы 4, микрокапсулы из примера В2, полученные включением только пептида А, могут содержать физиологически активное соединение, эффективно подавлять первоначальное интенсивное высвобождение физиологически активного соединения и высвобождают препарат примерно с постоянной скоростью в течение длительного периода времени.

Экспериментальный пример В3

Примерно 112 мг микрокапсул, описанных в примере В3, диспергировали в 0,3 мл среды для дисперсии (дистиллированная вода, содержащая 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата-80 и 15 мг маннита) и дисперсию вводили через иглу 22G крысам самцам в возрасте 7 дней SD подкожно в области спины. В определенное время после введения крыс умерщвляли и извлекали оставшиеся в месте введения микрокапсулы и количественно определяли пептид А, содержащийся в них, и эту величину делили на исходное содержание с получением относительного остаточного содержания, представленного в таблице 5.

Таблица 5
Относительное остаточное содержание: пептид А
Через один день	87.7%

Как следует из данных таблицы 5, микрокапсулы из примера В3, полученные включением только пептида А, могут содержать физиологически активное соединение, эффективно подавлять первоначальное интенсивное высвобождение физиологически активного соединения и высвобождают препарат примерно с постоянной скоростью в течение длительного периода времени.

Экспериментальный пример В4

Примерно 116 мг микрокапсул, описанных в примере В4, диспергировали в 0,3 мл среды для дисперсии (дистиллированная вода, содержащая 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата-80 и 15 мг маннита) и дисперсию вводили через иглу 22G крысам самцам в возрасте 7 дней SD подкожно в области спины. В определенное время после введения крыс умерщвляли и извлекали оставшиеся в месте введения микрокапсулы и количественно определяли пептид А, содержащийся в них, и эту величину делили на исходное содержание с получением относительного остаточного содержания, представленного в таблице 6.

Таблица 6
Относительное остаточное содержание: пептид А
Через один день	84.7%

Как следует из данных таблицы 6, микрокапсулы из примера В4, полученные включением только пептида А, могут содержать физиологически активное соединение, эффективно подавлять первоначальное интенсивное высвобождение физиологически активного соединения и высвобождают препарат примерно с постоянной скоростью в течение длительного периода времени.

Экспериментальный пример В5

Примерно 48,7 мг микрокапсул, описанных в примере В5, диспергировали в 0,3 мл среды для дисперсии (дистиллированная вода, содержащая 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата-80 и 15 мг маннита) и дисперсию вводили через иглу 22G крысам самцам в возрасте 7 дней SD подкожно в области спины. В определенное время после введения крыс умерщвляли и извлекали оставшиеся в месте введения микрокапсулы и количественно определяли пептид А, содержащийся в них, и эту величину делили на исходное содержание с получением относительного остаточного содержания, представленного в таблице 7.

Таблица 7
Относительное остаточное содержание: пептид А
Через один день	83.1%
Через две недели	73.0%
Через четыре недели	65.3%
Через восемь недель	49.1%
Через двенадцать недель	37.5%
Через шестнадцать недель	25.7%
Через двадцать недель	13.6%
Через двадцать шесть недель	2.4%
Через двадцать восемь недель	1.4%

Как следует из данных таблицы 7, микрокапсулы из примера В5, полученные включением только пептида А, могут содержать физиологически активное соединение, эффективно подавлять первоначальное интенсивное высвобождение физиологически активного соединения. Кроме того, микрокапсулы высвобождают физиологически активное соединение с постоянной скоростью в течение длительного периода времени.

Ссылочный пример С7

Раствор, полученный растворением 206,6 г полимера DL-молочной кислоты (среднемассовая молекулярная масса: 21900) в 354,8 г дихлорметана нагревали и выдерживали примерно при 30°С. Взвешивали порцию данного раствора массой 381,5 г и смешивали с водным раствором, полученным растворением 15,8 г лейпрорелина ацетата в 16,6 г водного раствора ледяной уксусной кислоты (0,6 г ледяной уксусной кислоты растворяли в 31,75 г дистиллированной воды) и нагревали примерно до 55°С и затем эмульгировали с использованием минимиксира (производства Tokushu Kika K.K.) с образованием эмульсии В/М (скорость вращения примерно 10000 об/мин). Затем данную эмульсию В/М охлаждали до 18,0°С, выливали в 25 л водного раствора, содержащего 0,1% (мас./мас.) поливинилового спирта (EG-40, производства Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd.) и 1% маннита, который предварительно выдерживали примерно при 18,0°С и затем вторично эмульгировали с использованием HOMOMIC LINE FLOW (производства Tokushu Kika K.K.) с образованием эмульсии В/М/В (скорость вращения турбины: примерно 7000 об/мин; скорость вращения циркуляционного насоса: примерно 2000 об/мин). Данную эмульсию В/М/В высушивали в воде в течение 3 ч, пропускали через сито с размером пор 75 мкм и затем микросферы постоянно осаждали с использованием центробежного сепаратора (H-600S, отечественный центробежный сепаратор) (скорость вращения: примерно 2000 об/мин; скорость потока: примерно 600 мл/мин) и собирали осажденные микросферы. Собранные микросферы вновь суспендировали в небольшом количестве дистиллированной воды, просеивали через стандартное сито, имеющее размер пор 90 мкм, к которым добавляли 18,9 г маннита и лиофилизовали с использованием лиофилизатора (Triomaster производства Kyouwa Sinkuu K.K.) с получением порошка (порошок из микросфер). Содержание лейпрорелина ацетата в полученных микросферах составляло 8,2%; и извлечение равнялось примерно 75%. С успехом эмульсию В/М можно получить добавлением уксусной кислоты и диспергирование полученных микрокапсул можно улучшить добавлением маннита во внешнюю водную фазу.

Экспериментальный пример С1

Примерно 110 мг микрокапсул, полученных в ссылочном примере С7, диспергировали в 0,3 мл среды для дисперсии (дистиллированная вода, содержащая 0,15 мг карбоксиметилцеллюлозы, 0,3 мг полисорбата-80 и 15 мг маннита) и дисперсию вводили через иглу 22G крысам самцам в возрасте 7 дней SD подкожно в области спины. В определенное время после введения крыс умерщвляли и извлекали оставшиеся в месте введения микрокапсулы и количественно определяли пептид А, содержащийся в них, и эту величину делили на исходное содержание с получением относительного остаточного содержания, представленного в таблице 8.

Таблица 8
Относительное остаточное содержание: пептид А
Через один день	96.6%
Через две недели	89.8%
Через четыре недели	84.1

Как следует из данных таблицы 8, микрокапсулы из ссылочного примера С7, полученные включением только пептида А, могут содержать физиологически активное соединение с высокой эффективностью включения и обладают хорошей диспергируемостью и также подавляют первоначальное интенсивное высвобождение физиологически активного соединения. Кроме того, данные микрокапсулы высвобождают физиологически активное соединение с постоянной скоростью в течение очень продолжительного периода времени.

Промышленная применимость

Композиция с постоянным высвобождением по настоящему изобретению может содержать физиологически активное соединение в высокой концентрации, подавлять первоначальное интенсивное высвобождение и достигать постоянной скорости высвобождения в течение продолжительного периода времени.

Формула изобретения

1. Фармацевтическая композиция с регулируемым высвобождением, включающая (1) производное LH-RH формулы 5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5 или его ацетат или его соль в количестве примерно от 14% (мас./мас.) до примерно 24% (мас./мас.) от общей массы всей композиции, (2) 3-окси-2-нафтойной кислоты или ее соли и (3) полимер молочной кислоты или ее соли, имеющий среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 50000, в котором содержание полимеров с молекулярной массой от 5000 или ниже, составляет 5% по массе или ниже, причем молярное соотношение 3-окси-2-нафтойной кислоты или ее соли к производному LH-RH или его соли равняется от 3:4 до 4:3.

2. Композиция с регулируемым высвобождением по п.1, где полимер молочной кислоты имеет среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 30000.

3. Лекарственный препарат для профилактики и лечения гормонзависимых заболеваний, включающий композицию с регулируемым высвобождением по п.1.

4. Препарат для профилактики или лечения рака простаты, гиперплазии простаты, эндометриоза, миомы матки, фибромы матки, преждевременного полового созревания, дисменореи или рака молочной железы, или контрацептивное средство, включающий композицию с регулируемым высвобождением по п.1.

5. Фармацевтическая композиция с регулируемым высвобождением, включающая производное LH-RH формулы 5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5 или его ацетат или его соль в количестве примерно от 3% (мас./мас.) до примерно 24% (мас./мас.) от общей массы всей композиции и полимер молочной кислоты или ее соли, имеющий среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 50000, в котором содержание полимеров с молекулярной массой 5000 или ниже составляет примерно 5% по массе или ниже.

6. Фармацевтическая композиция с регулируемым высвобождением, включающая производное LH-RH формулы 5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu -Leu-Arg-Pro-NH-C2H5 или его ацетат или его соль в количестве примерно от 14% (мас./мас.) до примерно 24% (мас./мас.) от общей массы всей композиции, 3-окси-2-нафтойную кислоту или ее соль и полимер молочной кислоты или ее соли, имеющий среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 50000, в котором содержание полимеров с молекулярной массой 5000 или ниже составляет примерно 5% по массе или ниже.

7. Композиция с регулируемым высвобождением по п.5, включающая (1) производное LH-RH или его соль в количестве примерно от 14% (мас./мас.) до примерно 24% (мас./мас.) от общей массы всей композиции и (2) полимер молочной кислоты или ее соли, имеющий среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 50000, в котором содержание полимеров с молекулярной массой 5000 или ниже составляет примерно 5% по массе или ниже.

8. Композиция с регулируемым высвобождением по любому из пп.5-7, где полимер молочной кислоты имеет содержание полимеров с молекулярной массой 3000 или ниже, равное примерно 1,5% по массе или ниже.

9. Композиция с регулируемым высвобождением по любому из пп.5-7, где полимер молочной кислоты имеет содержание полимеров с молекулярной массой 1000 или ниже, равное примерно 0,1% по массе или ниже.

10. Композиция с регулируемым высвобождением по любому из пп.5-7, где полимер молочной кислоты имеет среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 40000.

11. Композиция с регулируемым высвобождением по любому из пп.5-7, где полимер молочной кислоты имеет среднемассовую молекулярную массу от 17000 до 26000.

12. Композиция с регулируемым высвобождением по п.6, где молярное соотношение 3-окси-2-нафтойной кислоты или ее соли к производному LH-RH или его соли составляет от 3:4 до 4:3.

13. Композиция с регулируемым высвобождением по любому из пп.5-7, которую используют для инъекций.

14. Способ получения композиции с регулируемым высвобождением по п.5, включающий удаление растворителя из смешанного раствора производного LH-RH или его соли, и полимера молочной кислоты или ее соли, имеющего среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 50000, в котором содержание полимеров с молекулярной массой 5000 или ниже составляет примерно 5% по массе или ниже.

15. Способ получения композиции с регулируемым высвобождением по п.6, включающий удаление растворителя из смешанного раствора производного LH-RH или его соли, 3-окси-2-нафтойной кислоты или ее соли и полимера молочной кислоты или ее соли, имеющего среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 50000, в котором содержание полимеров с молекулярной массой 5000 или ниже составляет примерно 5% по массе или ниже.

16. Способ получения композиции с регулируемым высвобождением по п.15, включающий смешивание и диспергирование производного LH-RH или его соли в растворе в органическом растворителе, содержащем 3-окси-2-нафтойную кислоту или ее соль и полимер молочной кислоты или ее соли, имеющий среднемассовую молекулярную массу от 15000 до 50000, в котором содержание полимеров с молекулярной массой 5000 или ниже составляет примерно 5% по массе или ниже, и последующее удаление указанного органического растворителя.

17. Лекарственный препарат для профилактики и лечения гормонозависимых заболеваний, включающий композицию с регулируемым высвобождением по любому из пп.5-7.

Приоритет по пунктам:

29.06.2001 по пп.1-6, 8, 9, 11-17;

06.11.2001 по пп.7, 10.