(54) РЕЭПИТЕЛИЗИРУЮЩАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ КСАНТАНОВУЮ СМОЛУ

(57) Реферат:

Настоящее изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается применения ксантановой смолы в качестве активной основы, обладающей свойством реэпителизации, в частности относится к фармацевтической композиции, содержащей ксантановую смолу в качестве активной основы реэпителизации, необязательно смешанную с гиалуроновой кислотой. Изобретение также относится к способу получения реэпителизирующей композиции. Указанная композиция ускоряет и улучшает образование вновь растущего эпителия. 10 н. и 11 з.п. ф-лы, 11 табл.

(56) (продолжение):

CLASS="b560m"реферат. Bihari-Varga M et al. The effect of chondroitin-sulfate and hyaluronic acid on glycosaminoglycan and collagen synthesis and secretion by cultured arterial endothelial cells. Pathol Biol (Paris). 1981; 29(9):562-6 реферат.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к реэпителизирующей фармацевтической композиции, в особенности, для офтальмологического применения.

Уровень техники

Хорошо известно, что эпителиальные клетки, например, в роговице, могут страдать от повреждений, вызванных инородными телами, таких как царапины, порезы и раны (случайные, хирургические, иммунологические и т.д.), и постинфекционных язв. Повреждения такого рода, как правило, требуют длительных периодов заживления, вызывают значительный дискомфорт и часто закрываются не полностью.

Раскрытие изобретения

Целью настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, которая может ускорять реэпителизацию, в особенности, корнеальной ткани, и также хорошо переносится.

Такая цель достигается с использованием ксантановой смолы для получения лекарственного средства для лечения эпителиальных ран, а также фармацевтической композиции, содержащей ксантановую смолу, что детально изложено в прилагаемой формуле изобретения.

Другие характеристики и преимущества фармацевтической местной композиции, описанной в настоящем изобретении, станут очевидны из последующего описания некоторых предпочтительных воплощений составов фармацевтической композиции, которые приводятся в целях иллюстрации и не предназначены для истолковывания их как ограничения.

Неожиданной экспериментальной находкой стало наблюдение, что ксантановая смола проявляет значительную реэпитализирующую функцию, иначе говоря, она способна ускорять образование эпителиальных клеток на уровне зоны поврежденного эпителия, что также показано в эксперименте in vivo, описанном далее в настоящем описании.

Ксантановая смола является гетерополисахаридом с молекулярной массой 3-7,5×106 Да, получаемой методом ферментации с бактерией Xanthomonas campestris.

Основная структура ксантана представляет собой разветвленную цепь с главной цепью (14)-D-глюкозы, идентичной целлюлозе, где трисахаридная цепь с глюкозидной связью (13), состоящая из ацетилированной маннозы, глюкуроновой кислоты и маннозы, соединяется с каждым другим вторым остатком; наконец, к каждому углероду С4 и С6 концевого звена маннозы присоединяется молекула пировиноградной кислоты в различных соотношениях в пределах 25-50%, что завершает структуру боковой цепи полимера.

Опубликованные данные предлагают односпиральную конформацию (но нельзя исключать структуру двойной или тройной спирали), где боковые цепи полимера имеют склонность связываться с главной цепью (взаимодействия нековалентного типа), защищая имеющиеся в ней глюкозидные связи. Результатом является жесткая стержнеобразная структура, придающая хорошую устойчивость молекуле с отличной защитой от воздействия сильных кислот и оснований, высоких температур, в циклах замораживания и оттаивания, воздействия ферментов, длительного перемешивания, разрушения под действием сдвига, изменений ионной силы и рН.

В результате наблюдали, что вследствие только что описанных структурных свойств ксантановая смола в форме реформированного геля делает возможным адекватное осуществление важной функции механической защиты.

Кроме того, в ряде приведенных далее экспериментов неожиданно наблюдали, что смешивание ксантановой смолы как активной основы реэпителизирующей композиции в препарате в виде преформированного геля с гиалуроновой кислотой вызывает повышение скорости реэпителизации, промотирует реорганизацию вновь образующегося эпителия, что приводит к образованию клеточного слоя превосходного качества.

В частности, исследования заживления ран, осуществленные с помощью сканирующего электронного микроскопа, показывают неожиданную степень организации эпителия после обработки фармацевтической реэпителизирующей композицией по изобретению, что будет пояснено подробно.

Хорошо известно, что гиалуроновая кислота не только благоприятствует клеточной пролиферации, но также стабилизирует базальный слой эпителия, стимулирующий продуцирование тонкого слоя и фибронектина.

В любом случае, когда ксантановую смолу и гиалуроновую кислоту используют в виде смеси за их способность действовать как реэпителизирующие агенты, они обладают неожиданным синергичным действием.

Гиалуроновая кислота представляет собой высокомолекулярный полисахарид со свойствами полианиона, высокой способностью удерживать воду, вязкий, со свойствами биологического клея и псевдопластичности с неявной тиксотропией. Ее основную структуру составляют (14)-дисахаридные блоки, состоящие, каждый, из D-глюкуроновой кислоты и N-ацетил-D-глюкозамина, соединенных вместе через связь (13).

С учетом описанных наблюдений другое воплощение настоящего изобретения относится к местным реэпителизирующим фармацевтическим композициям в форме реформированного геля, состоящим, по существу, из ксантановой смолы как активной основы, смешанной, необязательно, с гиалуроновой кислотой, и фармакологически приемлемых добавок.

Процентное содержание ксантановой смолы относительно всего объема преформированного геля составляет, предпочтительно, от 0,7 до 5%, предпочтительнее - от 0,8 до 3%, и значительно предпочтительнее - от 0,9 до 1,5%.

Эксципиенты выбирают среди изотонических веществ, буферных веществ, растворителей или носителей, антиоксидантов, регуляторов рН и подобных веществ.

В частности, возможные изотонические вещества композиции изобретения могут являться ионными, такими как NaCl, KCl, или неионными, как, например, глицерин, маннит, или их смесью.

Возможные буферные вещества могут представлять собой вещества, обычно используемые, например, в глазных композициях, такие как фосфат, борат, ацетат, смесь указанных буферных веществ, такую как цитрат/фосфат, или даже буферные вещества, редко используемые в офтальмологической области, такие как трис-HCl или на основе гистидина или аргинина.

Поэтому композиция преформированного геля с ксантановой смолой может представлять собой сбалансированный физиологический раствор или, с другой стороны, необязательно сбалансированную солевую композицию из-за присутствия ионов Са+2 и Mg+2.

Приемлемые антиоксиданты включают цитрат, аскорбат или сульфат натрия. Приемлемыми регуляторами рН являются органические или неорганические кислоты или основания со своими соответствующими солями кислот и оснований.

Приемлемыми растворителями или носителями являются вода или смесь вода/масло.

Отмечено, что когда соли добавляют к композиции, содержащей >0,25% ксантана, происходит увеличение вязкости пропорционально концентрации ксантана и добавляемых солей, хотя плато вязкости достигается, например, при таком низком содержании NaCl как 0,1%. Следовательно, ксантан ведет себя иначе в отношении изменений ионной силы, чем другие полиэлекторолиты, добавление к которым солей (что снижает степень гидратации и отталкивание между цепями) промотирует межмолекулярное взаимодействие и свертывание молекул от статистического клубка (с более высокой вязкостью) до структуры компактного клубка (с более низкой вязкостью). В ксантановых растворах добавление солей снижает степень гидратации и отталкивание, из-за заряда, между карбоксилатными анионами боковых цепей молекулы, что в результате стабилизирует жесткую стержнеподобную конформацию и способствует образованию более прочной и более жесткой трехмерной сетки, что повышает вязкость (примерно в два раза при 0,1% NaCl в случае 1% ксантана), и появлению значительного предела текучести, что, вообще, делает растворы полимера более защищенными против таких факторов, как термообработка, воздействие кислот и оснований, длительное перемешивание и т.д.

В растворе одинарные спирали имеют склонность к ассоциации с образованием сложной упорядоченной сетчатой структуры жестких молекул, удерживающихся вместе за счет слабых вандерваальсовых сил. Влияние своеобразной и уникальной структуры ксантана в растворе, уже в умеренных концентрациях (1-2,5%), проявляется в гелеобразной консистенции с существенным пределом текучести (следовательно, с отличной способностью благоприятствовать образованию суспензий и эмульсий) и хорошей вязкостью.

Взятые вместе уже проверенные свойства наряду с низкой токсичностью, свойствами биологического клея и совместимостью с большинством обычных эксципиентов и доступных коммерческих средств упаковки делают ксантановую смолу весьма подходящей также в качестве системы доставки, а также защитного средства по чисто механическим причинам.

Как указывалось ранее, другое воплощение настоящего изобретения может включать гиалуроновую смолу.

Конкретно, количество гиалуроновой смолы, присутствующей в указанной композиции, колеблется от 0,01 до 1% от общего объема преформированного геля, предпочтительно - от 0,05 до 0,5%, еще лучше - от 0,1 до 0,4%. Гиалуроновая кислота присутствует в виде соли. Возможным противоионом может являться, например, натрий, калий, кальций или магний.

В еще одном воплощении настоящего изобретения реэпителизирующая фармацевтическая композиция может включать, кроме смеси ксантановой смолы и гиалуроновой смолы как агентов реэпителизации, одно или несколько фармакологических средств, выбранных среди противоинфекционных, противовоспалительных, анестезирующих и мидриатических средств.

Изобретение также раскрывается с помощью приведенных далее примеров некоторых композиций, не являющихся ограничительными.

Композиция 1
Компоненты	Количество	Функция
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Хлорид натрия	0,3500 г	Изотоническое вещество
Фосфат натрия двухосновный. 12Н2O	0,3638 г	Буфер
Фосфат натрия одноосновный. Н2O	0,0354 г	Буфер
Глицерин	1,0000 г	Изотоническое вещество
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель
Композиция 2
Компоненты	Количество	Функция
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Хлорид натрия	0,3500 г	Изотоническое вещество
Хлорид калия	0,1500 г	Изотоническое вещество
Хлорид магния. 6Н2О	0,0120 г	Изотоническое вещество
Хлорид кальция. 2Н2O	0,0084 г	Изотоническое вещество
Фосфат натрия двухосновный. 12Н2O	0,0890 г	Буфер
Фосфат натрия одноосновный. Н2O	0,0069 г	Буфер
Цитрат натрия. 2Н2О	0,0590 г	Буфер/антиоксидант
Глицерин	1,0000 г	Изотоническое вещество
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель

Композиция 3
Компоненты	Количество	Функция
Натриевая соль гиалуроновой кислоты	0,1500 г	Активная основа реэпителизации
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Хлорид натрия	0,3500 г	Изотоническое вещество
Хлорид калия	0,1500 г	Изотоническое вещество
Хлорид магния. 6Н2О	0,0120 г	Изотоническое вещество
Хлорид кальция. 2Н2O	0,0084 т	Изотоническое вещество
Фосфат натрия двухосновный. 12Н2O	0,0890 г	Буфер
Фосфат натрия одноосновный. Н2О	0,0069 г	Буфер
Цитрат натрия. 2H2O	0,0590 г	Буфер/антиоксидант
Глицерин	1,0000 г	Изотоническое вещество
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель
Композиция 4
Компоненты	Количество	Функция
Натриевая соль гиалуроновой кислоты	0,1500 г	Активная основа реэпителизации
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Хлорид натрия	0,3500 г	Изотоническое вещество
Хлорид калия	0,1500 г	Изотоническое вещество
Хлорид магния. 6Н2О	0,0120 г	Изотоническое вещество
Хлорид кальция. 2Н2O	0,0084 г	Изотоническое вещество
Трис, основание	0,2425 г	Буфер
HCl 1N, q.s. до	рН 7,4-7,6	Буфер
Цитрат натрия. 2Н2O	0,0590 г	Буфер/антиоксидант
Глицерин	0,5000 г	Изотоническое вещество
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель
Композиция 5
Компоненты	Количество	Функция
Сульфат нетилмицина,	0,4550 г	Активная основа
эквивалент нетилмицину основанию	0,3000 г
Гиалуронат натрия	0,1500 г	Активная основа реэпителизации
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Хлорид натрия	0,8700 г	Изотоническое вещество
Хлорид калия	0,1500 г	Изотоническое вещество
Гидроксид натрия, 1 М, q.s. до	рН 7,00-7,6	Регулятор рН
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель
Композиция 6
Компоненты	Количество	Функция
Сульфат нетилмицина,	0,4550 г	Активная основа
эквивалент нетилмицину основанию	0,3000 г
Гиалуронат натрия	0,1500 г	Активная основа реэпителизации
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Фосфат натрия двухосновный, додекагидрат	0,5000 г	Буфер
Фосфат натрия одноосновный, моногидрат	0,1465 г	Буфер
Цитрат натрия, дигидрат	2,1000 г	Буфер/антиоксидант
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель
Композиция 7
Компоненты	Количество	Функция
Сульфат нетилмицина,	0,4550 г	Активная основа
эквивалент нетилмицину основанию	0,3000 г
Гиалуронат натрия	0,1500 г	Активная основа реэпителизации
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Трис, основание	0,2425 г	Буфер
HCl 1 N, q.s. до	рН 7,4-7,6	Буфер
Цитрат натрия, дигидрат	2,1000 г	Буфер/антиоксидант
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель

Композиция 8
Компоненты	Количество	Функция
Сульфат нетилмицина, эквивалент нетилмицину основанию	0,4550 г 0,3000 г	Активная основа
Гиалуронат натрия	0,1500 г	Активная основа реэпителизации
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Трис,основание	0,2423 г	Буфер
HCl 1 N, q.s. до	рН 7,4-7,6	Буфер
Хлорид натрия	0,7000 г	Изотоническое вещество
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель
Композиция 9
Компоненты	Количество	Функция
Динатрийфосфат дексаметазона	0,1500 г	Активная основа
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Фосфат натрия двухосновный. 12H2O	0,5000 г	Буфер
Фосфат натрия одноосновный. Н2О	0,1465 г	Буфер
Цитрат натрия. 2Н2О	2,1000 г	Антиоксидант
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель
Композиция 10
Компоненты	Количество	Функция
Динатрийфосфат дексаметазона	0,1500 г	Активная основа
Сульфат нетилмицина,	0,4550 г	Активная основа
эквивалент нетилмицину основанию	0,3000 г
Ксантановая смола	1,0000 г	Активная основа реэпителизации
Фосфат натрия двухосновный. 12Н2O	0,5000 г	Буфер
Фосфат натрия одноосновный. Н2О	0,1465 г	Буфер
Цитрат натрия. 2Н2О	2,100 г	Антиоксидант
Дистиллированная вода, q.s. до	100,0 мл	Растворитель

Вообще, в композициях изобретения глицерин проявляет диспергирующее действие в отношении ксантановой смолы, предотвращая образование сгустков и комков во время фазы диспергирования полимера в Н2O.

Далее следует общее описание процедуры получения фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению. В порядке иллюстрации, получаемая композиция является композицией 100 мл/г продукта.

Процедура получения преформированного реэпителизирующего геля

В объем дистиллированной воды - примерно 50 мл - добавляют все составляющие композиции, и растворяют их, причем каждый компонент добавляют после того, как предшествующий компонент полностью растворится.

Если требуется для данной композиции предварительно определенное количество одного или нескольких фармакологических веществ, перечисленных выше, добавляют в раствор до того, как указанное(ые) фармакологическое(ие) вещество(а) полностью растворится/растворятся или будут смешаны.

Отдельно один грамм ксантановой смолы добавляют к 50 мл воды и диспергируют на поверхности жидкости без перемешивания для того, чтобы избежать образования комков. С другой стороны, дисперсию можно гомогенизировать с помощью лопастной мешалки или гомогенизатора с тем, чтобы ускорить процесс, избегая в то же время образования комков. Если требуется для данной композиции, в указанной фазе также диспергируют гиалуроновую кислоту.

Затем гомогенную дисперсию обрабатывают в автоклаве до тех пор, пока не получат минимальную F0=15, допустимую для стерильности (летальность, выраженная в обозначениях, равнозначных времени в минутах при температуре 121°С для уничтожения микроорганизмов в процессе стерилизации паром).

В указанный момент раствор добавок, стерилизованный фильтрацией (если суспензию стерилизуют соответствующим способом), в стерильных условиях добавляют к дисперсии ксантановой смолы и перемешивают в течение примерно 1 часа при скорости, которая обеспечит ровное перемешивание без излишней турбулентности, до тех пор, пока не получают однородный гель.

Наконец, гель можно асептически распределить в соответствующие емкости. Для того чтобы проиллюстрировать эффективность основных композиций изобретения, будут описаны два эксперимента, которые осуществляют для того, чтобы проверить на модели реэпитализации in vivo вышеуказанные композиции - одну (композиция 2), содержащую только ксантановую смолу (XNT), и другую (композиция 3), содержащую как ксантановую смолу, так и гиалуроновую кислоту (EPG) - в сравнении с раствором, содержащим только 0,15% гиалуроната натрия и соли (EYP), и солевым раствором без полимеров (SOL).

Эффективность реэпителизации

Различие между двумя экспериментами заключается в том, что первый предназначают для оценки динамических и количественных аспектов реэпителизации, а второй для оценки морфологических и качественных аспектов реэпителизации после обработки разными композициями. В первом эксперименте используют конфокальный офтальмоскоп для отслеживания скорости реэпителизации, а в последнем используют сканирующий электронный микроскоп (SEM) для анализа ультраструктуры.

Для каждого эксперимента используют новозеландских кроликов-альбиносов, разделенных на 6 обрабатываемых групп согласно описанному в следующих двух разделах.

Животные

Используют самцов новозеландских кроликов-альбиносов (Charles River Italia) средней массой 2,400 кг.

Животных помещают в клетки, где поддерживают стандартные условия влажности (RH 50%±10%) и температуры (19±2°С), при циклическом искусственном освещении (темнота/свет, 12 часов). Животных кормят и допускают к воде ad libitum.

Схемы и режим обработки

После проверки глаз животных для того, чтобы исключить случайные глазные патологии, животных распределяют в шесть групп для разной обработки согласно схеме, приведенной далее.

Животные, используемые для различных наблюдений и времени обработки

	Т0	Т24 час	Т48 час	Т72 час	Т96 час
Контроль	4	--	--	--
Необработанная рана	4	4	4	4	4
EPG	4	4	4	4	4
XNT	4	4	4	4	4
EYP	4	4	4	4	4
SOL	4	4	4	4	4

Легенда

Контроль: животные с интактной роговицей, не подвергающиеся фармакологической обработке.

Необработанная рана: животные с корнеальной раной, не подвергающиеся фармакологической обработке.

EPG, XNT, EYP, SOL: животные с корнеальной раной, подвергающиеся обработке разными композициями.

Все испытываемые вещества вводят 5 раз в сутки до конца эксперимента.

Экспериментальная модель

Животным дают наркоз посредством i.m. инъекции кетамина (37,5 мг/кг м.т.) и ксилазина (10 мг/кг м.т.) и оксибупрокаина (1 капля/глаз).

Корнеальную рану создают с использованием Algerbrush с 1-мм кончиком. С помощью стерильной парафильмовой маски с 6-мм отверстием в центре деэпителизируют площадь круга. Глаз сразу же промывают стерильным BBS для удаления клеточного дебриса и осуществляют обработку.

С течением времени оценивают состояние кроликов через 0, 24, 48, 72 и 96 часов с помощью CLSO в сочетании с системой обработки изображения или их умерщвляют для SEM-анализа (через 0,24,48 и 72 часа).

Метод исследования и результаты каждого эксперимента описываются далее.

Эксперимент с CLSO

Глаза кроликов каждой группы для обработки обрабатывают 25 мкл 0,5% раствора натрийфлуоресцеина. Через 2 минуты избыток флуоресцеина смывают физиологическим раствором. Затем кроликов, на которых воздействовали седативным средством, проверяют с помощью CLSO. Такая система обнаруживает флуоресцентный сигнал, происходящий от поврежденной зоны, лишенной эпителия, и позволяет количественно измерить площадь повреждения с помощью системы обработки изображения.

Результаты

Анализ с помощью CLSO показывает, что рана заживает спонтанно через 72 часа во всех обработанных группах.

Группа, обработанная композицией, содержащей в качестве активной основы только ксантановую смолу (XNT), показывает ускоренный процесс реэпитализации уже через 24 часа после обработки. Закрытие раны имеет место, по меньшей мере, на 30% раньше, чем в группах "Необработанная рана", EYP и SOL. Более высокая скорость реэпитализации (на 50% выше, чем в других группах) наблюдается через 48 часов после обработки как в группе, обработанной композицией только с ксантановой смолой (XNT), так и в группе, обработанной композицией с ксантановой смолой, смешанной с гиалуроновой кислотой (EPG). Не наблюдается различий между группой, обработанной только гиалуронатом натрия (EYP), и группами SOL и "Необработанная рана".

Эксперимент с SEM

В предварительно установленные моменты времени (0, 24, 48, 72 часа после начала обработки) животных групп с разной обработкой умерщвляют (танакс, i.v.). Сразу же после умерщвления энуклеируют луковицу и роговицу иссекают и сразу же фиксируют 2% глутаровым альдегидом в течение 24 часов. После фиксации роговицу анализируют с помощью SEM.

Результаты

На всех обработанных для наблюдения роговицах сразу же после корнеальной деэпителизации (Т0) обнаруживают раны с острыми выпуклыми краями и обнаженной стромой. Контрольные образцы (интактные роговицы) имеют однородный эпителий с хорошей степенью клеточной дифференцировки и нормальным наличием "дырок" (ограниченные участки, лишенные микроворсинок, присутствующих на поверхности эпителиальных клеток с возможно соединительной функцией), пилообразное смыкание клеток и многочисленные микроворсинки, имеют поверхностный эпителий типичного мозаичного вида, что отражает различные стадии мейоза (темные, средние и светлые клетки).

Т24

Через двадцать четыре часа после начала эксперимента на роговицах группы "Необработанная рана" обнаруживают деэпитализированные участки с полностью обнаженной стромой, с краями зоны, лишенной эпителия, острыми, но сильно выпуклыми. Все вновь образовавшиеся клетки, присутствующие на краях "раны" или чуть в стороне, показывают несколько микроворсинок и неотчетливо дифференцируются на темные, средние и светлые.

Края ран роговиц в группе SOL похожи на края в предыдущей группе, но вновь образовавшиеся клетки более дифференцированы с наличием трех стадий дифференцировки и более обильными микроворсинками. Кроме того, клетки являются афферентно вытянутыми в противоположность образцам, взятым в группе "Необработанная рана", где продолговатая форма менее выражена.

В роговицах группы EYP край лишенной эпителия зоны уплощен и ограничен кольцом дифференцированных вновь образовавшихся клеток афферентно вытянутого вида.

Роговицы в группе XNT имеют вид, в большой степени напоминающий вид в группе EYP.

В роговицах группы EPG обнаруживают уплощенный край раны с клетками с микроворсинками, более многочисленными, чем в группах других обработок. Вновь образовавшиеся клетки показывают благоприятное число "дырок".

Т48

В роговицах группы "Необработанная рана" при наблюдении через 48 часов при наименьшем увеличении обнаруживают полностью дезорганизованную деэпителизированную зону с заметными и зазубренными краями и вновь образовавшиеся клетки с частично расширенными границами. Небольшое число клеток являются удлиненными, и немногочисленные микроворсинки короткие и распределены неравномерно при отсутствии дифференцировки между светлыми, средними и темными клетками.

В образцах группы SOL также обнаруживают деэпителизированную зону с довольно неровными очертаниями с заметными краями, хотя вновь образовавшиеся клетки выглядят более дифференцированными, и микроворсинки более многочисленны и фактически нормальной формы. Края клеток, граничащие с краями реэпителизированной зоны, расширены и в некоторых случаях рельефные.

Роговицы в группе EYP реэпителизированы так же, как роговицы в других группах. Однако, очертания деэпителизированной зоны остаются неровными, даже если степень дифференцировки, распределение и качество микроворсинок вновь образовавшихся клеток хорошие.

В образцах группы, обработанной XNT, обнаруживают неровные края раны, но состояние вновь образовавшегося эпителия заметно лучше, чем в других группах. Зона нового эпителия вблизи краев раны представляет кольцо афферентно вытянутых клеток. Однако, степень клеточной дифференцировки, а также очертания клеток хорошие, хотя зоны, где клетки выглядят рельефными, частично остаются. Микроворсинки нормальные и многочисленные.

Организация образцов группы, обработанной EPG, напоминает организацию в группах EYP и XNT. Однако, край раны, как и в предыдущий момент наблюдения, все еще плоский. В результате, вновь образовавшаяся зона с афферентно ориентированными клетками больше, и вообще, даже при наименьшем увеличении, деэпителизированная зона на вид более однородна.

Т72

Через 72 часа после обработки во всех группах обнаруживают зажившую рану, хотя остаются небольшие неравномерно разбросанные области без клеток и с утолщенными границами. Такое явление является частью нормального процесса реэпителизации и вызывается непрерывной перестройкой вновь образовавшегося эпителия.

Различия между группами заключаются в организации вновь образовавшегося эпителия. Действительно, в группе "Необработанная рана" эпителий выглядит однородным из-за наличия коротких и малочисленных микроворсинок, что придает эпителию "тестообразный" вид. Таким образом, типичная дифференцировка темных, средних и светлых клеток отсутствует, за исключением зон с вновь образовавшимся эпителием, удаленных от центра, поскольку в указанных зонах, вероятно, клеточный цикл возвращается к нормальному, в то время как в центре размножение клеток все еще хаотичное.

Определенная степень организации эпителия проявляется в образцах SOL. Действительно, даже в центральной зоне, в которой реэпителизация происходит позднее, имеется намек на дифференцировку и, по сравнению с роговицами группы "Необработанная рана", микроворсинки более многочисленные и "нетестообразные".

Различия между группами, обработанными продуктами, содержащими биополимеры, остаются даже через 72 часа, хотя роговицы, обработанные EPG, выглядят лучше, чем обработанные XNT, и последние выглядят лучше, чем роговицы в группе EYP. Вообще, вид роговиц, обработанных EPG, схож с видом контрольных образцов (интактные роговицы), с многочисленными и длинными микроворсинками, благоприятным числом дырок, равномерно распределенных в клеточном слое, и хорошим представительством клеток на различных стадиях дифференцировки.

Согласно описанному выше, реэпителизирующая фармацевтическая композиция в форме преформированного геля ускоряет восстановление поврежденного эпителия.

Кроме того, указанная композиция весьма благоприятствует реорганизации эпителия и, следовательно, повышает адгезию и устойчивость нового эпителия в нижележащей соединительной ткани.

Другим преимуществом композиции по настоящему изобретению является приготовление ее в форме преформированного геля, вследствие чего реэпителизирующая фармацевтическая композиция также осуществляет функцию механической защиты.

Предпочтительно, когда композиция изобретения содержит натриевую соль гиалуроновой кислоты, она обнаруживает свойства, благоприятные для продукта для местного применения.

В частности, консистенция является консистенцией почти прозрачного, светло-кремового, приятного на ощупь не липкого легко размазываемого и впитывающегося мягкого геля. Ощущения после инсталляции являются схожими: препарат не вызывает чувства жжения, ощущение "неясного видения" очень кратковременное или отсутствует, в то время как ощущение свежести и смягчения в глазу остается. Кроме того, продукт легко вводить как в смысле высвобождения из емкости (легкое образование капли и подача), так и распределения капель на поверхности глаза.

Кроме того, неожиданно обнаружилось, что гиалуроновая кислота, хотя и присутствует в воде в концентрациях почти в семь раз меньших, чем ксантановая смола, обладает значительной стабилизирующей способностью в отношении конформации последней.

Действительно, вязкость растворов ксантановой смолы без солей после термообработки снижается почти на 30%.

Напротив, вязкость растворов ксантановой смолы и натриевой соли гиалуроновой кислоты после термообработки снижается только на 10-15%.

В частности, исследования реологических свойств продукта дает следующие результаты.

В качестве иллюстрации исследуют диаграмму вязкость/скорость сдвига) (/) композиции, содержащей 1% ксантановой смолы + гиалуроновая кислота, и сравнивают с диаграммой для композиций 1% ксантана + солевой раствор (BSS) и 1% ксантана + H2O.

Реологический профиль полного продукта показывает очень высокую (вязкость) и хорошо определяемое напряжение сдвига при низком , и, следовательно, хорошую прочность, загущенную консистенцию и удержание в месте нанесения. Вязкость () быстро падает, когда скорость сдвига возрастает, с высокой степенью псевдопластичности, что подтверждает хорошую намазываемость и распределение системы в месте нанесения и создает у пользователя комфортное ощущение. Кривая /, полученная путем постепенного увеличения скорости сдвига, совпадает с кривой обратного хода, полученной путем ее постепенного уменьшения; следовательно, система не является тканетропной и вновь приобретает свою структуру незамедлительно после снятия напряжения сдвига.

В частности, в случае глазных применений, такое свойство выгодно передается как восстановление структуры и вязкости продукта между морганиями, причем в результате повышается время корнеального контакта.

Как можно оценить из описанного выше, реэпителизирующая фармацевтическая композиция по настоящему изобретению отвечает требованиям, указанным во вводном разделе, и преодолевает недостатки существующего уровня техники.

Очевидно, что специалист в данной области техники, с целью удовлетворения возможных и специфических требований к композиции, может внести различные модификации и изменения в вышеуказанную композицию без отхода от объема изобретения, определяемого приведенной далее формулой изобретения.

Формула изобретения

1. Применение ксантановой смолы в качестве активной основы реэпителизирующего лекарства.

2. Применение ксантановой смолы в качестве активной основы реэпителизирующего лекарства для получения лекарственного средства для лечения ран эпителия.

3. Применение ксантановой смолы по п.2, где указанный эпителий является эпителием роговицы.

4. Применение ксантановой смолы по любому из пп.2 и 3 для промотирования пролиферации эпителиальных клеток.

5. Фармацевтическая реэпителизирующая композиция в форме преформированного геля, содержащая в качестве активной основы ксантановую смолу, фармакологически приемлемые добавки и при необходимости гиалуроновую кислоту.

6. Фармацевтическая композиция по п.5, где указанная активная основа включает ксантановую смолу в количествах от 0,7 до 5% от общего объема указанного преформированного геля.

7. Фармацевтическая композиция по п.5, где указанная ксантановая смола присутствует в количествах от 0,8 до 3% от общего объема указанного преформированного геля.

8. Фармацевтическая композиция по п.5, где указанная ксантановая смола присутствует в количествах от 0,9 до 1,5% от общего объема указанного преформированного геля.

9. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-8, где указанные добавки включают изотонические вещества, предпочтительно выбранные из группы, включающей ионные или неионные вещества или их смесь, буферные вещества, предпочтительно выбранные из группы, включающей фосфат или борат, ацетат, цитрат/ацетат, трис-HCl или вещества на основе гистидина или аргинина, антиоксиданты, предпочтительно выбранные из группы, включающей цитрат, аскорбат или сульфат натрия, регуляторы рН, предпочтительно выбранные из группы, включающей органические или неорганические кислоты или основания, а также их солевые формы, растворители, предпочтительно выбранные из группы, включающей воду или смесь масло/вода.

10. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-9, где указанная гиалуроновая кислота присутствует в количествах от 0,01 до 1% от общего объема преформированного геля.

11. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-9, где указанная гиалуроновая кислота присутствует в количествах от 0,05 до 0,5% от общего объема преформированного геля.

12. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-9, где указанная гиалуроновая кислота присутствует в количествах от 0,1 до 0,4% от общего объема преформированного геля.

13. Фармацевтическая композиция по любому из пп.5-9, где указанная гиалуроновая кислота присутствует в форме натриевой соли.

14. Фармацевтическая реэпителизирующая композиция, состоящая из следующих компонентов:

Ксантановая смола	1,0000 г
Хлорид натрия	0,3500 г
Фосфат натрия двухосновный·12Н2О	0,3638 г
Фосфат натрия одноосновный·Н2О	0,0354 г
Глицерин	1,0000 г
Дистиллированная вода	До 100,0 мл

15. Фармацевтическая реэпителизирующая композиция, состоящая из следующих компонентов:

Гиалуронат натрия	0,1500 г
Ксантановая смола	1,0000 г
Хлорид натрия	0,3500 г
Хлорид калия	0,1500 г
Хлорид магния·6Н2О	0,0120 г
Хлорид кальция·2Н2О	0,0084 г
Фосфат натрия двухосновный·12H2O	0,0890 г
Фосфат натрия одноосновный·Н2О	0,0069 г
Цитрат натрия·2Н2O	0,0590 г
Глицерин	1,0000 г
Дистиллированная вода	До 100,0 мл

16. Фармацевтическая реэпителизирующая композиция, состоящая из следующих компонентов:

Сульфат нетилмицина, эквивалент	0,4550 г
нетилмицину основанию	0,3000 г
Гиалуронат натрия	0,1500 г
Ксантановая смола	1,0000 г
Фосфат натрия двухосновный, додекагидрат	0,5000 г
Фосфат натрия одноосновный, моногидрат	0,1465 г
Цитрат натрия, дигидрат	2,1000 г
Дистиллированная вода	До 100,0 мл

17. Фармацевтическая реэпителизирующая композиция, состоящая из следующих компонентов:

Динатрийфосфат дексаметазона	0,1500 г
Ксантановая смола	1,0000 г
Фосфат натрия двухосновный·12H2O	0,5000 г
Фосфат натрия одноосновный·H2O	0,1465 г
Цитрат натрия·2Н2О	2,1000 г
Дистиллированная вода	До 100,0 мл

18. Фармацевтическая реэпителизирующая композиция, состоящая из следующих компонентов:

Динатрийфосфат дексаметазона	0,1500 г
Сульфат нетилмицина, эквивалент	0,4550 г
нетилмицину основанию	0,3000 г
Ксантановая смола	1,0000 г
Фосфат натрия двухосновный·12H2O	0,5000 г
Фосфат натрия одноосновный·Н2О	0,1465 г
Цитрат натрия·2Н2О	2,100 г
Дистиллированная вода	До 100,0 мл

19. Реэпителизирующая фармацевтическая композиция в форме преформированного геля, содержащая в качестве активной основы реэпителизации ксантановую смолу, смешанную с гиалуроновой кислотой, и лекарством, выбранным из группы противоинфекционных, противовоспалительных, асептических и мидриатических средств, и фармакологически приемлемые добавки.

20. Способ получения реэпителизирующей фармацевтической композиции по любому из пп.5-19, включающий стадии растворения необходимого количества добавок в соответствующем объеме воды, добавления при необходимости других фармакологических веществ, стерилизации раствора, диспергирования в адекватном объеме воды предварительно установленного количества ксантановой смолы без перемешивания, для того чтобы избежать образования комков, стерилизации указанной дисперсии, добавления к дисперсии ксантановой смолы раствора добавок, необязательно добавляемых с фармакологическими веществами, и перемешивания, избегая турбулентности, распределения геля, полученного на предыдущих стадиях, в соответствующие емкости в асептических условиях.

21. Способ по п.20, где стадию диспергирования ксантановой смолы осуществляют через гомогенизацию.